肌球蛋白轻链激酶在哮喘小鼠气道炎症及肺功能中的作用的研究

发布时间：2020-06-30 01:18

【摘要】：研究背景支气管哮喘是一种常见的呼吸道慢性炎症性疾病,主要特征包括气道炎症,多种刺激因素能够使气道呈现高反应性,广泛而多变的可逆性气流受限以及随病程的延长而导致的气道结构的改变,即气道重构。引起哮喘发病的主要原因是Th1/Th2比例失衡,Th1细胞产生的白细胞介素-2、干扰素γ(IFN-γ)和肿瘤坏死因子α参与细胞免疫应答诱导的炎症反应,而大多数过敏性气道炎症是Th2细胞过度增多诱导释放细胞因子白细胞介素-4(IL-4)、白细胞介素-5(IL-5)等引起的。其中,IL-4和IFN-y是Th1/Th2细胞分化中的特征因子。肌球蛋白轻链激酶(MLCK)是一种依赖于Ca2+-钙调蛋白的激酶,对肌肉收缩有重要作用。有研究表明,哮喘患者支气管平滑肌细胞肌球蛋白轻链激酶的含量较正常细胞增加。本实验利用建成小鼠哮喘模型,目的是为了探讨MLCK对哮喘小鼠的气道炎症和肺功能的影响,为治疗哮喘寻找新的方向。目的通过测定MLCK及炎性介质在哮喘模型小鼠中的表达及肺功能的变化,探究MLCK对哮喘气道炎症的影响,以及在肺功能中的作用。方法将20只清洁级为SPF级、6-7周龄、雌性,BALB/c小鼠,随机分为对照组、哮喘组2组,每组各10只。利用鸡卵白蛋白(OVA)注射致敏法构造小鼠哮喘模型。哮喘组第0、7、14天OVA/氢氧化铝生理盐水混悬液(含20μgOVA和4mg氢氧化铝)0.2ml/只腹腔注射致敏,第21天开始雾化5%OVA生理盐水2ml,每天30min,连续激发一周。对照组以同体积生理盐水代替致敏剂和激发剂。通过肺功能仪器来分别检测两组小鼠肺功能,摘取小鼠肺组织,切片,观察病理改变,免疫组织化学染色法观察肺组织中MLCK的表达,显微镜下血清中白细胞及嗜酸性粒细胞计数,ELISA方法检测肺泡灌洗液中炎性介质IL-4、IFN-y浓度,Western blot法分析肺组织中MLCK的表达,qPCR检测MLCK mRNA表达。结果1.哮喘组小鼠肺功能指标低于对照组(P0.05),反映气道高反应性的肺阻力明显升高(P0.05);2.哮喘组小鼠白细胞及嗜酸性粒细胞计数高于对照组(P0.05);3.哮喘组小鼠BALF中炎性介质IL-4的浓度高于对照组(P0.05)。哮喘组IFN-γ的浓度低于对照组(P0.05)。4.哮喘组小鼠肺组织MLCK在蛋白和基因水平的表达量均高于对照组(P0.05)。结论肌球蛋白轻链激酶促进哮喘小鼠炎性介质的分泌,可能参与气道炎症的反应并影响肺功能。
【学位授予单位】：山东大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R562.25
【图文】：

小鼠血清中嗜酸性粒细胞及白细胞计数

图５邋ＥＬＩＳＡ法检测小鼠ＢＡＬＦ中炎性介质的表达逡逑２４逡逑

【参考文献】

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本文编号：2734640