壳寡糖在防治卵巢衰老中的作用及其与免疫功能的相关性研究

发布时间：2020-09-29 18:37

　　目的:针对卵巢衰老,目前临床治疗的主要手段为激素补充疗法,但多项临床研究表明,激素补充疗法会增加子宫内膜癌、浸润性乳腺癌、冠心病、脑卒中等一系列疾病的患病风险。多年来关于免疫与生殖功能相关关系的研究结果表明,机体自出生前至出生后的整个生命过程,生殖功能受免疫系统的调节。壳寡糖(Chitosan Oligosaccharide,COS),是天然糖中唯一大量存在的碱性氨基寡糖,其对免疫功能有增强作用,对哺乳动物的胚胎发育有促进作用,并且对子宫和卵巢功能有保护作用。本研究拟通过规律且连续的灌胃方式,在体观察:COS对卵巢衰老是否具有一定的保护和拯救作用,以及该作用与免疫功能的相关性。方法:实验分为两个部分:(1)COS在预防卵巢衰老中的作用(预防组):以环磷酰胺/白消安(Cyclophosphamide/Busulfan,CY/BUS),联合用药模拟病理性卵巢衰老之前,分组分别给予低剂量(Prevention-low,100mg/kg/d)、中剂量(Prevention-mid,200mg/kg/d)及高剂量(Prevention-high,300 mg/kg/d)的COS灌胃;(2)COS在治疗卵巢衰老中的作用(治疗组):以CY/BUS制备病理性卵巢衰老模型后,分组给予低剂量(Treatment-low,100mg/kg/d)、中剂量(Treatment-mid,200mg/kg/d)及高剂量(Treatment-high,300 mg/kg/d)的COS灌胃。单纯COS组(200COS,200mg/kg/d)为给予正常小鼠COS灌胃。给药结束后,通过测定卵巢指数、卵泡数、雌孕激素水平、生殖细胞标志物MVH/Fragilis的表达量、β-半乳糖甘酶染色等检测卵巢功能及卵巢衰老状况,通过计胸腺指数、计脾脏指数、观察胸腺和脾脏的形态及腹腔巨噬细胞吞噬中性红实验和测定免疫因子等方法监测小鼠机体的免疫功能,并观察卵巢功能、卵巢衰老状况和免疫功能的相关关系。结果:(1)在预防组,通过COS灌胃,胸腺指数、脾脏指数、观察胸腺和脾脏的形态及腹腔巨噬细胞吞噬功能,免疫因子IL-2、TNF-α的表达量均增高;免疫因子IL-4降低;保护了CY/BUS对胸腺和脾脏结构的破坏。在治疗组,上述指标呈现同样的变化趋势。(2)在预防组,通过COS灌胃,反应卵巢功能的指标,如卵巢指数、卵泡数、雌孕激素水平、生殖细胞标志物MVH/Fragilis的表达量均在灌胃后表现不同程度的增高;反映卵巢衰老的指标,如卵巢中衰老基因p16、p21、p53表达量和β-半乳糖苷酶染色程度灌胃后均下降。在治疗组,上述指标呈现同样的变化趋势。(3)分析卵巢功能、卵巢衰老状况和免疫功能的相关关系时发现,各因子m RNA表达量相关性分析结果为,MVH/Fragilis mRNA与IL-2/TNF-αmRNA变化趋势一致;p16/p21/p53 mRNA与IL-4 mRNA变化趋势一致并与MVH/Fragilis mRNA和IL-2/TNF-αmRNA负相关。结论:(1)COS通过维持胸腺及脾脏的正常内部形态保证其功能,活化巨噬细胞,提高T淋巴细胞和B淋巴细胞的活性,以及平衡细胞免疫与体液免疫等机制维护雌性小鼠免疫功能;(2)COS可能通过提高免疫功能在保护和拯救雌性小鼠卵巢功能损伤及衰老中发挥作用。
【学位单位】：南昌大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2017
【中图分类】：R711.75
【部分图文】：

壳寡糖,结构式,生殖系统

图 1.1 壳寡糖结构式壳寡糖对生殖功能的影响寡糖已较广泛运用于维持雌性动物生殖系统的保健。2013 年[35]已螯合锌对雌性昆明小鼠繁殖性能、子宫卵巢组织结构以及对雄性小、睾丸附睾结构的影响，结果显示实验小鼠生殖系统状况都有所改壳寡糖可影响小鼠胚胎体外发育，研究者通过向体内受精和体外受

影响图,脾脏指数,胸腺指数,脾脏

15图 3.1 COS 对小鼠胸腺及脾脏指数的影响Fig 3.1 Effect of COS on thymus and spleen index in miceontrol 组及 COS（200 mg/kg.d）组脾脏、胸腺指数的变化；ontrol 组、CY/BUS 组及不同剂量 COS 预防组（100-300 mg/kg.d）胸腺指数的变ontrol 组组、CY/BUS 组及不同剂量 COS 预防组（100-300 mg/kg.d）脾脏指数的ontrol 组组、CY/BUS 组及不同剂量 COS 治疗组（100-300 mg/kg.d）胸腺指数的ontrol 组组、CY/BUS 组及不同剂量 COS 治疗组（100-300 mg/kg.d）脾脏指数的0.01，***p<0.001，与 Control 组比较；##p<0.01，###p<0.001，与 CY/BUS 组比.2 对免疫脏器胸腺及脾脏形态学的影响图 3.2A 显示，COS (200mg/kg/d)能使脾脏红髓中的皮索有增多趋势，明显变化，巨噬细胞数量及形态也无明显变化。从图 3.2B 可见，CY

结构变化,脾脏

图 3.2 COS 对小鼠脾脏结构的影响Fig 3.2 Effect of COS on spleen structure in miceA：Control 组及 COS（200 mg/kg.d）组脾脏结构变化；B：Control 组、CY/BUS 组及不同剂量 COS 预防组（100-300 mg/kg.d）脾脏结构变化；C：Control 组、CY/BUS 组及不同剂量 COS 治疗组（100-300 mg/kg.d）脾脏结构变化。BA

【参考文献】