Angptl8对摄食和能量平衡的调节作用及其机制的研究

发布时间：2020-10-24 20:00

　　 背景:众所周知,肥胖已成为影响全球人类健康的重要因素。世界卫生组织称,至2030年,全球肥胖的发病率将达到57.8%。肥胖可以引发全身各个系统的疾病,全球有50%以上的死亡是由肥胖相关的慢性疾病造成的。因此,肥胖问题亟待解决。血管生成素样蛋白8(angiopoietin like protein 8,Angptl8)是由肝脏分泌的的脑肠肽,可通过抑制脂蛋白酯酶的活性调节脂代谢,另外,与机体的摄食状态存在紧密的联系。目的:(1)观察Angptl8在下丘脑摄食调节相关核团的分布。(2)探究外周(尾静脉)及中枢(侧脑室)注射Angptl8对于摄食的调节作用。(3)研究尾静脉及侧脑室注射Angptl8对于下丘脑摄食相关核团c-Fos表达的影响。(4)探讨尾静脉及侧脑室注射Angptl8调控摄食的相关分子机制。(5)观察尾静脉及侧脑室注射Angptl8对于小鼠白色脂肪堆积及棕色脂肪组织产热的影响。方法:(1)通过尾静脉注射观察外周Angptl8对C57BL/6J小鼠摄食的影响及长期给药对体重的影响。(2)通过侧脑室置管、侧脑室微量注射探究中枢Angptl8对C57BL/6J小鼠摄食的影响及长期给药对体重的影响。(3)通过免疫组化技术检测Angplt8在下丘脑摄食相关核团的分布、外周及中枢注射Angptl8对下丘脑摄食相关核团c-Fos及Neuropeptide-Y(NPY)表达的影响。(4)通过苏木素伊红(hematoxylineosin,HE)染色法研究棕色脂肪组织形态,蛋白质印迹法、实时荧光定量PCR等分子生物学技术检测解偶联蛋白-1(uncoupling protein-1,Ucp-1)表达水平。结果:(1)尾静脉注射0.1ml浓度为3μg/ml或30μg/ml的Angptl8可明显减少小鼠的夜间12小时累积摄食量,并且抑食作用呈现剂量依赖性(3μg/ml:5.14±0.26 g vs.5.95±0.21 g,P0.05;30μg/ml:4.58±0.28 g vs.5.95±0.21 g,P0.05);侧脑室注射2μl浓度0.3μg/μl的Angptl8可明显减少小鼠夜间6小时累积摄食(2.00±0.28 vs.3.82±0.25 g,P0.05)。单次尾静脉(30μg/ml)和侧脑室(0.3μg/μl)注射Angptl8均可减少小鼠24h体重增加量。(2)Angptl8在下丘脑摄食相关核团室旁核(paraventricular nucleus,PVN),背内侧核(dorsomedial hypothalamus,DMH),腹内侧核(ventromedial hypothalamus,VMH)和弓状核(arcuate nucleus,ARC)均有表达,但免疫组化和PCR结果显示禁食前后上述核团Angptl8表达无明显变化。(3)尾静脉注射Angptl8可显著减少DMH中c-Fos免疫阳性神经元的数量(103.70±8.55 vs.73.50±11.52个,P0.05)。侧脑室注射Angptl8可显著减少PVN(161.00±5.41 vs.66.33±9.65个,P0.05)、DMH(125.13±8.86 vs.98.00±9.02个,P0.05)和ARC(100.80±26.26 vs.154.08±35.15个,P0.05)中c-Fos免疫阳性神经元的数量。侧脑室注射Angptl8减少DMH(37.67±5.69 vs.20.25±7.18个,P0.05)中c-Fos和NPY共染的免疫阳性神经元数量。(4)连续9天长期给予尾静脉注射Angptl8,小鼠总体重增量显著降低(3.69±1.10g vs.6.88±0.64 g,P0.05),附睾脂肪占总体重比例降低(0.01±0.0008 vs.0.01±0.0031,P0.05),腹股沟脂肪占总体重比例(0.01±0.00 vs.0.01±0.00,P0.05)和血清游离脂肪酸含量(0.17±0.07μmol/mg vs.0.19±0.03μmol/mg,P0.05)未发生变化。连续9天给予中枢注射Angptl8,小鼠总体重增量显著降低(0.79±0.60g vs.2.64±0.36 g,P0.05),附睾脂肪占总体重比例(0.11±0.04 vs.0.06±0.01,P0.05)和腹股沟脂肪占总体重比例(0.08±0.02 vs.0.05±0.01,P0.05)显著升高,而血清游离脂肪酸含量显著降低(0.15±0.05μmol/mg vs.0.10±0.03μmol/mg,P0.05)。(5)尾静脉注射Angptl8显著降低棕色脂肪组织(brown adipose tissue,BAT)占总体重比例(0.0030±0.0001 g vs.0.0037±0.0030 g,P0.05),侧脑室注射Angptl8显著升高BAT占总体重比例(0.02±0.01 g vs.0.01±0.00 g,P0.05),但两者对BAT细胞形态和产热相关蛋白Ucp-1表达均未产生影响。结论:(1)Angptl8广泛存在于下丘脑摄食相关核团PVN、VMH、DMH和ARC中。(2)Angptl8通过影响下丘脑DMH中NPY神经元的活性发挥抑制摄食的作用。(3)Angptl8影响C57BL/6J小鼠脂肪堆积但对棕色脂肪组织产热没有影响。本实验结果为进一步探究Angptl8在肥胖和能量代谢紊乱等疾病的调控中发挥的作用提供了一定的实验参考依据。
【学位单位】：青岛大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2019
【中图分类】：R589.2
【部分图文】：

1 小鼠置于定位仪上暴露前后囟、矢状调整耳杆位置使得前囟、后囟在同e Brain in Stereotaxic Coordinates》一，中线旁开 0.3 mm，深度 2.2-2.3 位点钻孔，将套管（26 gauge）植入位侧脑室打孔（左）并将套管植入侧脑水泥和牙科螺钉固定外套管，使外

材料与方法图 1 小鼠置于定位仪上暴露前后囟、矢状缝定位、置管：调整耳杆位置使得前囟、后囟在同一水平面且同考《The Mouse Brain in Stereotaxic Coordinates》一书定位小鼠侧：前囟后 1 mm，中线旁开 0.3 mm，深度 2.2-2.3 mm[55]。标记在颅骨表面定位点钻孔，将套管（26 gauge）植入侧脑室（图 2

图 3 牙科水泥固定套管鼠随机分为对照组（0.9%生理盐水 Angptl8 组（0.3 μg/μl），用注射针连/μl 的 Angptl8 和 0.3 μg/μl 的 Angpt，停留 2 分钟后缓慢拔针（注射针比
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本文编号：2854917