miR-133b在多囊卵巢综合征发病机制中作用的初步研究

发布时间：2020-11-18 19:56

　　 目的多囊卵巢综合征目前已经成为研究女性不孕的热点,已有研究表明micro RNAs在其发病机制中发挥着重要作用。研究mi R-133b在PCOS大鼠模型卵巢中的表达、对大鼠生育能力及子代鼠表型的影响,探讨mi R-133b在多囊卵巢综合征发病中的作用及相关机制,并进一步探讨PCOS是否具有遗传倾向。方法(1)来曲唑诱导PCOS大鼠动物模型,分别用mi R-133b agomir和mi R-133b antagomir干预PCOS大鼠模型,观察PCOS疾病状态下、经过干预后大鼠外周血血清激素水平与卵巢组织学改变以及靶基因TAGLN2表达水平。(2)与雄鼠合笼,记录每组大鼠的妊娠情况,计算妊娠率。(3)子鼠养到6周后处死,观察子代鼠的卵巢组织学改变,mi R-133b及靶基因TAGLN2的表达水平。结果(1)光学显微镜下观察,相对于对照组,PCOS组母代大鼠卵巢卵泡多呈囊性扩张,颗粒细胞层数减少,少见各级发育期卵泡及黄体,卵泡内卵母细胞或放射冠消失,卵巢正常结构破坏。PM组母代大鼠卵巢内可见不同发育时期的卵泡及黄体,多数卵泡为初级卵泡,颗粒细胞层排列整齐,偶可见扩张的囊性卵泡,卵巢结构趋于正常。PI组母代大鼠卵巢内卵泡多呈囊性扩张,颗粒细胞层数减少,少见各级发育期卵泡。(2)PCOS组母代大鼠血清T水平明显高于其余三组,差异具有统计学意义(P0.01)。而PM组母代大鼠血清T水平显著低于PCOS组,而与对照组相比无明显差异。PCOS组母代大鼠血清LH水平、LH/FSH水平显著高于对照组,PM组显著低于PCOS组,而与对照组相比差异无统计学意义(P0.05)。PCOS组母代大鼠血清E2水平低于其余三组。PCOS组母代大鼠血清INS水平高于其余三组,差异有统计学意义(P0.05)。(3)Real-time PCR显示相对于对照组,PCOS组母代大鼠卵巢内mi R-133b水平显著降低,差异具有统计学意义(P0.01),PM组母代大鼠卵巢内mi R-133b水平比PCOS组明显增加,与对照组无统计学差异(P0.05)。PI组大鼠的mi R-133b水平也显著性低于对照组(P0.01)。PCOS组TAGLN2的表达水平显著性低于对照组(P0.01)。(4)Western blot显示与对照组相比,PCOS组母代大鼠卵巢中的TAGLN2表达水平显著减少(P0.01)。PM组大鼠的卵巢中TAGLN2的表达水平比PCOS组升高,与对照组相比,差异无统计学意义。PI组其卵巢中的TAGLN2的表达水平也显著降低(P0.01)。(5)经过统计发现,PCOS组母代大鼠的妊娠率显著低于对照组(33.33%vs100%,P0.01),而PM组的妊娠率高于PCOS组,与对照组无明显差异(83.33%vs 100%,P0.05)。PI组大鼠的妊娠率明显低于对照组(33.33%vs 100%,P0.01)。(6)对照组子代大鼠卵巢皮质内可见不同发育时期的卵泡及黄体,成熟卵泡内卵母细胞透明带明显,多层颗粒细胞排列整齐,卵巢组织学形态正常;PCOS组子代大鼠卵巢内可见到多个扩张的卵泡,卵母细胞少见或缺如,颗粒细胞层减少,少见各级发育期的卵泡,可见少数黄体;PM组子代大鼠卵巢内可见不同发育时期的卵泡及黄体,颗粒细胞层排列整齐,扩张性卵泡少见;PI组子代大鼠卵巢皮质内扩张的卵泡少见,可见不同发育时期的卵泡及黄体。(7)PI组子代大鼠血清T水平明显高于其余三组(P0.05)PM、PI组子代大鼠血清FSH水平高于对照组,差异有统计学意义(P0.05)。PI组子代大鼠血清LH、LH/FSH水平高于对照组,但差异不显著(P0.05)。PCOS组、PM组、PI组子代大鼠血清E2水平均低于对照组,除PCOS组外,其余两组差异有统计学意义(P0.05)。PI组子代大鼠血清INS水平低于其余三组,差异无统计学意义(P0.05)。(8)Real-time PCR显示相对于对照组,PCOS子代组大鼠卵巢内mi R-133b水平显著升高,差异具有统计学意义(P0.01)。PM子代组、PI子代组mi R-133b水平与对照组无统计学差异(P0.05)。PCOS子代鼠的TAGLN2表达水平与对照组相比无统计学差异(P0.05)。(9)Western blot显示与对照组相比,PCOS组子代大鼠卵巢中的TAGLN2表达水平与对照组相比无显著性差异(P0.05)。PM组大鼠的卵巢中TAGLN2的表达水平与对照组相比,显著性降低,差异有统计学意义(P0.01)。PI组其卵巢中的TAGLN2的表达水平也显著降低(P0.01)。结论1、来曲唑诱导SD大鼠PCOS模型方法可行,模型鼠的卵巢病理改变、血清性激素水平变化与PCOS患者临床表型相同。。2、PCOS大鼠卵巢中mi R-133b表达水平显著性降低。3、mi R-133b可靶向调控TAGLN2的表达。增加mi R-133b可上调TAGLN2的表达,改善PCOS大鼠的症状,增加妊娠率。4、干预母代PCOS大鼠的mi R-133b表达可影响其子代的mi R-133b表达及临床表型。
【学位单位】：广州医科大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2017
【中图分类】：R711.75
【部分图文】：

第一部分 动物模型的建立大鼠合笼代建模成功后，于下午18:00左右将雄性大鼠和雌性大鼠按1:2合笼，次道涂片，镜下观察若见到精子，记为妊娠第一天。卵巢切片HE染色石蜡切片．取材：将大鼠卵巢剪掉脂肪组织及输卵管组织后，放入4%多聚甲醛中定时间小于24h。．脱水：用30%、50%、70%、80%、90%的乙醇溶液脱水各40min，放100%乙醇中，重复3次，每次20min。

ptical density，OD），检测波长为 450nm，利用标准曲线的方程式计的浓度。学方法 SPSS 19.0 软件进行统计学分析，计量资料均以均数±标准差（ X ±s态分布资料两组间比较采用 t 检验，四组间比较采用方差分析。非正态采用 Kruskal-Wallis 检验；计数资料以率（%）表示，组间比较采用 <0.05 表示差异具有统计学意义。情周期的改变模第 12 天开始，通过阴道涂片观察大鼠动情周期的改变，连续观察期。结果如图 2，PCOS 大鼠动情周期明显紊乱，无规律，且大多处。而对照组大鼠具有非常规律的动情周期。

3.2大鼠卵巢组织外观形态及组织学改变PCOS模型组大鼠的卵巢呈现桑葚状，包膜下可见多个扩张囊泡；而对照组大鼠卵巢无明显异常，见图3。对照组大鼠卵巢内可见各级发育卵泡及黄体，颗粒细胞排列整齐；PCOS组大鼠卵巢内各级卵泡及黄体少见，取而代之的是各种扩张的囊泡，表面颗粒细胞数量减少，偶见的卵泡内卵母细胞或放射冠消失，闭
【参考文献】

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1 刘艳丽;来曲唑法和脱氢表雄酮法诱导PCOS大鼠模型的比较研究[D];郑州大学;2011年

本文编号：2889134