骨保护素调控肝脏胰岛素敏感性的分子机制研究

发布时间：2020-12-05 15:25

　　第一部分体外分析OPG对肝细胞糖代谢的影响目的:在体外探索OPG（骨保护素）对肝细胞糖代谢及胰岛素信号通路的作用方法:构建OPG过表达及抑制腺病毒,并通过感染肝模型细胞hepal1-6和L02细胞系,采用高糖高脂FFAs或葡萄糖胺Glc N造胰岛素抵抗模型。通过过碘酸希夫染色检测细胞中糖原含量变化。用试剂盒定量检测其糖原含量。用2-NBDG试剂盒检测细胞糖摄取能力。采用western blot技术检测糖代谢相关基因p-Ins R,t-Ins R,p-AKT,t-AKT,PEPCK,G6Pase蛋白水平的表达情况。结果:成功构建OPG过表达及抑制病毒并感染细胞,并建立胰岛素抵抗细胞模型。糖原染色及定量检测结果均显示OPG能抑制糖原合成。且OPG过表达处理后细胞糖摄取能力降低。western blot结果中,在胰岛素抵抗情况下,OPG过表达使PEPCK及G6Pase水平升高,并且胰岛素信号通路中关键因子p-AKT明显降低,而p-Ins R水平却无变化。结论:OPG能够调控肝细胞的糖代谢,且其可能是通过作用于Ins R的下游分子从而来调控糖代谢关键信号分子AKT的活性。第二部分OPG基因敲除... 

【文章来源】：重庆医科大学重庆市

【文章页数】：117 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

蛋白质浓度标准曲线

重庆医科大学博士研究生学位论文染 OPG 过表达腺病毒后 OPG 表达增加（A.空载和 OPG 过表达腺病毒荧光毒感染后 OPG 的 mRNA 表达 C.病毒感染后 OPG 的蛋白表达）(P < 0.05)e 1.2 Infected with OPG overexpression adenovirus increased expression of Ocence of control adenovirus and OPG overexpression adenovirus B. mRNA exG after adenovirus infection C. Protein expression of OPG after adenovirus in**P < 0.05 compared to Adv-GFP

化水平明显降低(P < 0.05)，提示所选用的葡萄糖胺及 FFAs 的作用时间和浓度条件下出现了胰岛素抵抗。为后续研究细胞胰岛素信号通路提供良好的基础。图1.4 细胞胰岛素抵抗造模成功（A.葡萄糖胺及FFAs处理后InsR及AKT蛋白水平变化图 B.葡萄糖胺处理后 InsR 及 AKT 蛋白水平的变化对应柱状图 C. FFAs 处理后 InsR 及 AKT 蛋白水平的变化对应柱状图）(**P < 0.05)Figure 1.4 Successful modeling of cellular insulin resistance (A. Changes in InsR and AKTprotein levels after glucosamine and FFAs treatment B. Quantitative analysis ofcorresponding p-InsR protein Levels after glucosamine treatment C. Histogram correspondingand p-AKT protein Levels after FFAs treatment) **P < 0.05 compared to CT or BSA3.3 过表达 OPG 后,糖原合成减少，糖摄取降低小鼠肝癌细胞 Hepal1-6 细胞和人正常肝细胞 L02 感染 OPG 过表达腺病毒（Adv-OPG）或者对照空载病毒（Adv-GFP）后，用葡萄糖胺进行造模处理，观察细胞糖原合成情况及葡萄糖摄取情况。结果如图 1.5A，糖原染色结果显示胰岛素抵抗情况下 OPG 过表达后细胞内的糖原颗粒明显减少了；定量检测细胞内的糖


本文编号：2899670