腺苷酸环化酶3基因肥胖相关单核苷酸多态性研究

发布时间：2020-12-07 03:43

　　腺苷酸环化酶3（AC3）基因突变引起的肥胖,是迄今为止发现的第一个单基因肥胖疾病。尽管大量的基因组关联分析数据证明,人类AC3上存在多个与肥胖相关的SNP,但这些SNP位点是否对AC3的表达及功能有所贡献尚未探明。CRISPR/Cas9技术可以进行单碱基编辑,因此本文在对人类AC3基因肥胖相关SNP位点进行生物信息学分析的基础上,以293T细胞为主要实验材料,利用CRISPR/Cas9技术对AC3基因上肥胖相关SNP位点进行编辑,探究SNP位点对AC3基因表达的影响及其机制:1、对人类AC3基因肥胖相关SNP位点进行生物信息学分析:1)对蛋白的翻译后修饰位点以及3’UTR上miRNA结合位点进行预测分析,发现仅在exon1和exon17上的SNP位点可能发生磷酸化,且3’UTR上的SNP位点无miRNA结合;2)预测基因上SNP位点的转录因子结合情况,发现可能与EMX家族,OTX家族,KLF家族等转录因子结合,为研究SNP调控AC3表达的机制奠定基础。2、为研究exon13 SNP（rs2289092）,exon17 SNP（rs1127568）,3’UTR SNP（rs1044040... 

【文章来源】：河北大学河北省

【文章页数】：104 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

腺苷酸环化酶3的结构

图 1-2 人类 AC3 基因上存在多个与肥胖相关的 SNP 位点Fig.1-2 Multiple obesity-related SNP sites on the human AC3 gene.3 CRISPR / Cas9 基因编辑技术及其应用.3.1 CRISPR / Cas9 基因编辑技术简介CRISPR/Cas9 最初在细菌和古生菌中作为获得性免疫系统而被发现，通过作用于的外源遗传物质使其降解而达到免疫效果[45-47]。CRISPR/Cas9 系统主要由 Cas9 核和一段短的引导 RNA（sgRNA，要求 3’端必须含有 PAM 序列）组成基因编辑系统图 1-3 所示。CRISPR/Cas9 基因编辑系统在 gRNA 的引导下，Cas9（WT 的 Cas9，spCas9）蛋靶基因结合并进行切割引起 DNA 双链断裂（DSB）[48]，引发细胞内的非同源性末合(Non-homologous end joining,NHEJ)或同源介导的双链 DNA 修复（Homoloirected repair，HDR）途径[49]。在进行同源重组时，NHEJ 途径在进行修复时很容易

图 1-3 CRISPR / Cas9 基因编辑原理图Fig.1-3 CRISPR / Cas9 gene editing principle（引自 https://image.so.com/crispr+cas9 原理图）/ Cas9 单碱基编辑的应用 2/3 的人类遗传性疾病是由于单个碱基发生改变而病。单碱基疾病是由于基因水平上发生突变引起的从基因上改变碱基序列的基因治疗成为单碱基疾只是全基因组上的一对碱基发生了突变，要对其进确的基因编辑效率，而以往的基因编辑技术都不足于造成单碱基疾病治疗举步维艰的局面。CRISPR医学的研究，带来了基因治疗的曙光[51,52]。技术可以用于进行单碱基编辑实验已经在众多研行单碱基编辑可以在体外进行致病性单碱基突变


本文编号：2902553