IRAK-M单核苷酸多态性在哮喘发生中的作用及其转录调控机制研究

发布时间：2020-12-09 16:28

　　目的:IL-1R相关激酶（IRAK）-M在哮喘气道炎症期间能够调节肺脏免疫。然而,当气道炎症持续时IRAK-M的调节作用不同。IRAK-M单核苷酸多态性与儿童哮喘发病相关已有报道,但目前仍缺乏IRAK-M单核苷酸多态性与成人哮喘关系的研究。在本研究中,我们将探讨IRAK-M基因组区域单核苷酸多态性在中国北方汉族成人哮喘发生中的作用及其转录调控机制。方法:（1）所有研究对象均来自于北京协和医院或民航总医院。哮喘诊断均由有经验的经过统一培训的呼吸内科专家根据中华医学会呼吸病学分会哮喘学组制定的支气管哮喘诊断标准作出。哮喘组共纳入679例中国北方汉族成人哮喘患者,对照组共纳入669例健康体检者。所有患者均需完成详细的病史采集、肺功能检查、血常规检查及血清IgE检查,并采集外周静脉血用于基因单核苷酸多态性检测。选取IRAM-M基因组区域9个SNP,采用SNaPshot技术进行外周血SNP分型,进行基于群体的成人哮喘遗传易感性分析;（2）应用荧光定量PCR技术,分析SNP位点rs1624395不同等位基因对哮喘患者外周血IRAK-M mRNA表达水平的影响;（3）利用公共数据库信息预测SNP位点... 

【文章来源】：北京协和医学院北京市 211工程院校 985工程院校

【文章页数】：83 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

图５．?多态性对哮喘患者外周血／见ｍＲＮＡ表达的影响??

０００?ｒｐｍ／分钟离心２分钟，收集滤液为回收产物。??ｃ－ＪｕｎＰＣＲ扩增结果：以反转录产物ｃＤＮＡ为模板，ＰＣＲ扩増条带大小在９９６ｂｐ??处，与预期结果一致，如图１所示：??图１．人源ｃ－Ｊｕｎ基因ＰＣＲ电泳图??２．１．４目的片段与线性化原核表达载体连接??将回收后的目的片段ｃ－Ｊｕｎ与双酶切原核表达载体ｐＥＴ－２８ａ－Ｈｉｓ－ＭＢＰ进行连接，??连接条件：１６°Ｃ连接４ｈ。??反应体系?１０?ｐＬ：?２ｘＭＩＸ?５?｜ｉＬ；载体?１?ｐＬ；?ｃ－Ｊｕｎ?４?｜ａＬ，加灭菌水ｄｄ?Ｈ２０至?１０?叫。??４８??

ＰＣＲ反应条件为：９５°Ｃ预变性１０分钟，３５个循环（９４°Ｃ变性３０秒，６０°Ｃ退火３０??秒，７２°Ｃ延伸２分钟），７２°Ｃ延伸１０分钟，反应结束后１％琼脂糖凝胶检测。??挑取单菌落进行ＰＣＲ鉴定，扩增条带大小与预期结果一致，如图２所示：??图２．人源ｃ－Ｊｕｎ基因菌液ＰＣＲ鉴定结果??２．１．７序列测定与结果分析??原核表达载体ｐＥＴ－２８ａ－Ｈｉｓ－ＭＢＰ－ｃ－Ｊｕｎ菌液ＰＣＲ鉴定阳性菌株送至生工生物进??行序列测定，测序结果与ＮＣＢＩ登陆序列进行比对，比对结果显示表达载体构建成??功，序列比对结果说明ｐＥＴ－２８ａ－Ｈｉｓ－ＭＢＰ－ｃ－Ｊｕｎ原核表达载体构建成功。??４９??

【参考文献】：
期刊论文
[1]我国十城市支气管哮喘控制和疾病管理及患者认知水平的变化[J]. 林江涛,王文巧,周新,殷凯生,黄茂,刘春涛,王长征,陈萍,袁雅冬,蔡绍曦,吴昌归,李靖,林其昌,周建英,刘辉国,顾玉海,黄信刚,孙德俊,杨晓红,杨岚,霍建民,陈卓昌,周玮,蒋萍,唐华平,刘荣玉,张伟,陈一强,黄奕江,刘晓菊,戴路明,叶贤伟,胡成平,张捷,许建英.  中华结核和呼吸杂志. 2018 (03)
[2]中国城乡成年人群哮喘患病状况及其影响因素[J]. 马倩倩,杨土保.  中南大学学报(医学版). 2017(09)
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本文编号：2907149