Wistar大鼠脑发育早期母体甲状腺激素缺乏对后代脑发育影响及机制研究

发布时间：2020-12-10 01:36

　　目的:母体甲状腺功能减退影响后代脑发育过程中神经元的迁移、分化、树突和轴突的生长,以及突触形成和髓鞘形成。后代表现为智力发育不良,语言记忆能力下降,严重者出现呆小症。上世纪六十年代,人们普遍认为甲状腺激素（TH）不能够通过胎盘,对甲状腺激素影响脑发育的相关研究主要集中在出生后阶段。随着优生优育需求的提高,医学筛查手段,生物分子技术的进展,发现胎儿在宫内甲状腺未发育完全且甲功未建立之前,脑组织中已经有甲状腺激素受体的表达且体内能够检测到一定量的甲状腺激素。这说明妊娠期间母体甲状腺激素能够通过胎盘屏障到达胎儿体内。胎儿甲状腺功能建立之前,母体甲状腺激素的缺乏也能够导致胎儿出生后智力下降。哺乳动物脑发育按照一定的时间和空间次序进行,且甲状腺激素的调节作用具有时间和空间特异性。即甲状腺激素对不同组织和不同细胞存在不同的作用,而且对于同一组织或细胞在不同阶段的调节作用也不尽相同。脑发育不同阶段母体甲状腺激素缺乏对后代神经精神发育的影响是否存在差异仍不清楚。围产期甲状腺激素过量能够导致后代的神经元分化加速。妊娠期间特异的应激状态,容易发生妊娠一过性甲状腺毒症,研究发现妊娠一过性毒症对妊娠结局有影响... 

【文章来源】：中国医科大学辽宁省

【文章页数】：119 页

【学位级别】：博士

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摘要
Abstract
英文缩略语
第一部分：脑发育不同阶段母体甲状腺激素缺乏对后代神经精神发育影响的动物研究
    1 前言
    2 材料与方法
        2.1 实验材料
            2.1.1 实验动物
            2.1.2 主要仪器设备
            2.1.3 主要试剂
        2.2 实验方法
            2.2.1 造模方法
            2.2.2 母鼠眶后采血方法
            2.2.3 仔鼠取脑过程
            2.2.4 ELISA法测定母鼠甲功、仔鼠甲功和仔鼠脑组织中甲状腺激素含
            2.2.5 翻身校正反射（Righting reflex）
            2.2.6 触须引发的前肢放置试验（Vibrissae-elicited forelimb placing test）
            2.2.7 长时程增强（Long-term potentiation, LTP）
            2.2.8 旷场实验（Open field test）
            2.2.9 高架十字迷宫（Elevated plus maze）
            2.2.10 高架零迷宫（Elevated zero maze）
            2.2.11 旋转加速实验（Rotarod test）
            2.2.12 水迷宫（Morris water maze）
            2.2.13 强迫游泳（Forced swimming test）
        2.3 统计学处理
    3 结果
        3.1 造模情况
        3.2 后代一般情况
        3.3 后代PND10甲功
        3.4 仔鼠PND5、10大脑皮层发育相关行为学实验
        3.5 仔鼠PND10长时程增强
        3.6 成年仔鼠自主活动及焦虑行为相关行为学实验
        3.7 成年仔鼠抑郁相关行为学实验
        3.8 成年仔鼠运动及学习记忆相关行为学实验
    4 讨论
    5 结论
第二部分：脑发育第一阶段母体甲状腺激素异常对后代神经精神发育影响的动物研究
    1 前言
    2 材料与方法
        2.1 实验材料
            2.1.1 实验动物
            2.1.2 主要仪器设备
            2.1.3 主要试剂
        2.2 实验方法
            2.2.1 动物造模过程及处理时间点
            2.2.2 甲功测定
            2.2.3 水迷宫（Morris water maze）
            2.2.4 条件恐惧实验（Fear conditioning test）
            2.2.5 长时程增强（Long-term potentiation）
            2.2.6 镀银染色
            2.2.7 实时定量PCR （Quantitative real-time PCR）
            2.2.8 Western Blotting
        2.3统计学处理
    3 结果
        3.1 造模情况
            3.1.1 妊娠大鼠GD10天血清TT4和TSH水平
            3.1.2 妊娠大鼠GD18天血清TT4和TSH水平
        3.2 后代仔鼠PND10血清和大脑皮层组织匀浆TT4水平
        3.3 仔鼠PND40水迷宫结果
        3.4 仔鼠PND40条件恐惧实验
        3.5 仔鼠PND40长时程增强
        3.6 PND40天仔鼠神经元轴突镀银染色
        3.7 real-time PCR结果
            3.7.1 P40天仔鼠海马组织甲状腺激素反应基因mRNA的表达
            3.7.2 P40天仔鼠皮层组织甲状腺激素反应基因mRNA表达
            3.7.3 P40天仔鼠海马组织神经营养因子mRNA表达比较
            3.7.4 P40天仔鼠皮层组织神经营养因子mRNA表达比较
            3.7.5 P40天仔鼠海马组织神经导向因子mRNA表达比较
            3.7.6 P40天仔鼠皮层组织神经导向因子mRNA表达比较
            3.7.7 P40天仔鼠海马组织GTPase家族因子mRNA表达比较
            3.7.8 P40天仔鼠皮层组织GTPase家族因子mRNA表达比较
        3.8 Western blot结果
            3.8.1 P40天仔鼠海马组织GTPase家族因子蛋白表达比较
            3.8.2 P40天仔鼠皮层组织GTPase家族因子蛋白表达比较
    4 讨论
    5 结论
第三部分:脑发育第一阶段母体甲状腺激素缺乏后代GD17天胎脑大脑皮层转录组分析
    1 前言
    2 材料和方法
        2.1 实验材料
            2.1.1 实验动物
            2.1.2 主要实验仪器
            2.1.3 主要实验试剂
        2.2 实验方法
            2.2.1 动物造模过程及处理时间点
            2.2.2 石蜡切片
            2.2.3 尼氏染色（Nissl staining）
            2.2.4 激光捕获显微切害lj （Laser capture microdissection）
            2.2.5 微量RNA提取
            2.2.6 RNA质量检测
            2.2.7 转录组测序（RNA sequencing, RNA-seq）
        2.3 统计学分析
    3 结果
        3.1 造模情况
        3.2 尼氏染色
        3.3 RNA样品处理
            3.3.1 LCM后微量RNA提取
            3.3.2 第一次总RNA混样样品质检结果
            3.3.3 Trizol法提取4%多聚甲醛固定后皮层组织总RNA
            3.3.4 第二次总RNA质检结果
            3.3.5 重新造模、新鲜脑组织体视显微镜下分离皮层，Trizol法提取总RNA
            3.3.6 第三次质检结果
            3.3.7 测序结果
        3.4 仔鼠PND10皮层和海马组织甲状腺激素反应基因表达
    4 讨论
    5 结论
本论文创新性的自我评价
参考文献
文献综述
    参考文献
攻读学位期间取得的研究成果
致谢
个人简历



本文编号：2907844