骨细胞Wnt/β-Catenin信号在BMSCs成骨分化中的作用研究

发布时间：2020-12-21 23:39

　　目的:探讨骨细胞Wnt信号通路对骨髓间充质干细胞（BMSCs）成骨分化的作用及其分子机制。方法:利用条件性基因敲出Cre/loxp技术制备特异性激活骨细胞Wnt/β-Catenin信号通路的小鼠;体外分离其与（同窝对照）小鼠的骨细胞,并分别与野生型小鼠骨髓间充质干细胞共培养;碱性磷酸酶（ALP）染色及活性定量、茜素红（Alizarinred）染色检测共培养早期成骨分化和晚期钙盐沉积;Real-Time PCR检测骨细胞Notch信号配体Jag1、Jag2、Dll1、D114及共培养后成骨分化特异标志物Runx2、ALP、Osteocalcin的mRNA表达水平。随后于共培养中加入Notch信号通路化学抑制剂DAPT（对照组加DMSO）,再次行碱性磷酸酶（ALP）染色及活性定量和Real-Time PCR检测成骨分化特异标志物表达水平。结果:Wnt/β-Catenin激活的骨细胞其自身Jag1、Jag2、Dll4 mRNA表达较对照组骨细胞明显升高（P<0.05）,与BMSCs共培养后成骨转录因子Runx2,成骨分化特异标志物ALP、Osteocalcin mRNA的表达较野生型明... 

【文章来源】：重庆医科大学重庆市

【文章页数】：35 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

小燕签固型鉴定

成骨分化实验于共培养第１０天行碱性磷酸酶（ＡＬＰ）染色、茜素红染色及成骨分??化特异性标志物基因水平检测，结果显示骨细胞Ｗｎｔ激活组相较于对照组，ＡＬＰ??活性明显增加（图２?（ａ）），钙盐沉积明显增加（图２?（ｂ）），成骨分化转录因??子Ｒｍｉｘ２ｍＲＮＡ水平增加１５０％?（图３?（ａ）），碱性磷酸酶ｍＲＮＡ水平增加１３８％??（图３?（ｂ））、生化活性高１６０％?（图２?（ｃ）），骨生成代谢标志物骨钙蛋白的??表达多２７４％?（图３?（ｃ））。提示骨细胞Ｗｎｔ信号促进了?ＢＭＳＣ的成骨分化。??１?６１?０?０１５ｌ?＊?ｓ？ｒ＋Ｂ？??＊?丁??１－６－?ｔ?４－?Ｔ?０，０１－?■■??０．８２－?ｊ?Ｈ?０．００５－?■??Ｉ?ｎｌ?ｎｌ??〇?（ａ）?°?（ｂ）?°?（ｃ）??图３成骨分化特异性标志物ｍＲＮＡ表达情况（＊Ｐ＜０．０５）??Ｆｉｇ．３?ｍＲＮＡ?ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｏｆ?ｏｓｔｅｏｂｌａｓｔｉｃ?ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ?ｍａｋｅｒｓ?（?＊Ｐ＜０．０５）??１３??

化特异性标志物基因水平检测，结果显示骨细胞Ｗｎｔ激活组相较于对照组，ＡＬＰ??活性明显增加（图２?（ａ）），钙盐沉积明显增加（图２?（ｂ）），成骨分化转录因??子Ｒｍｉｘ２ｍＲＮＡ水平增加１５０％?（图３?（ａ）），碱性磷酸酶ｍＲＮＡ水平增加１３８％??（图３?（ｂ））、生化活性高１６０％?（图２?（ｃ）），骨生成代谢标志物骨钙蛋白的??表达多２７４％?（图３?（ｃ））。提示骨细胞Ｗｎｔ信号促进了?ＢＭＳＣ的成骨分化。??１?６１?０?０１５ｌ?＊?ｓ？ｒ＋Ｂ？??＊?丁??１－６－?ｔ?４－?Ｔ?０

【参考文献】：
期刊论文
[1]下调骨细胞TGF-β/Smad4信号可抑制小鼠BMSCs成骨及破骨分化[J]. 代光明,任磊,陈虹,刘文,陈宇,何小强,刘伟,涂小林,黄伟.  基础医学与临床. 2017(06)



本文编号：2930724