Clock基因调节胰岛β细胞胰岛素分泌分子机制的研究
发布时间：2021-01-26 14:44
目的:随着生物钟节律紊乱病生理机制的逐步阐明,其与2型糖尿病发生发展过程的相关机制研究已经成为国际研发热点。有研究表明,时钟基因在机体葡萄糖稳态调节过程中扮演着至关重要的角色。但分子时钟调控节律性胰岛素分泌以及维持葡萄糖生理稳态的具体分子机制尚未完全明了。本研究主要对时钟调控家族核心成员Clock蛋白对胰岛素分泌调节的作用机制进行初步的探讨。方法（1）检测SD大鼠不同器官和组织中Clock m RNA表达水平。（2）q RT-PCR检测INS-1细胞中Clock m RNA节律性表达。（3）q RT-PCR及Western blot检测si RNA转染INS-1细胞后转染效率以及抑制Clock内源性表达后INS-1细胞胰岛素合成相关基因INS-1、INS-2 m RNA表达。（4）GSIS实验检测抑制Clock内源性表达后INS-1细胞胰岛素分泌的变化。（5）q RT-PCR检测INS-1细胞钙离子通道节律性表达。（6）q RT-PCR及Western blot检测抑制Clock内源性表达后电压依赖性钙离子通道m RNA和蛋白的水平。（7）荧光探针法检测抑制Clock内源性表达后细胞内...
【文章来源】：天津医科大学天津市 211工程院校
【文章页数】：97 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
预测结合位点CHIP实验Cacna1c-1Cacna1c-2Cacna1c-3Cacna1c-4
41性 Clock 表达后的 CHIP 实验trl siRNA 相比，p<0.05因子 Clock 与 Cacna1c 启动子区位点的相互作 作为模板扩增 Clock 编码区序列，并从 HindIIINA3.1 载体上，命名为 Clock Construct；另外，
k 过表达质粒 BamHI 和 HindIII 双酶切鉴定结果；BglII 和 KpnI 双酶切鉴定结果 结果验证的结合位点，构建仅包含 Cacna1c 启动子a1c promoter 质粒，将构建好的 Cacna1c promoter 质粒分别转染 293AD 细胞，结果显示，与阴性对照粒组的荧光素酶活性明显增加，说明构建的 Cacna1；将 Clock 过表达质粒与 Cacna1c promoter 质粒共转告基因结果显示，Clock 能够显著的增加 Cacna1c pa1c promoter 质粒中的结合位点进行突变，随后进一 Cacna1c promoter 突变质粒共转染，结果显示 Cmoter 质粒的转录活性明显减少，失去了对 Clock 的 Cacna1c promoter-444~-454 位点区域，并调控其转1.52.0VeClseActivity*
本文编号：3001295
【文章来源】：天津医科大学天津市 211工程院校
【文章页数】：97 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
预测结合位点CHIP实验Cacna1c-1Cacna1c-2Cacna1c-3Cacna1c-4
41性 Clock 表达后的 CHIP 实验trl siRNA 相比，p<0.05因子 Clock 与 Cacna1c 启动子区位点的相互作 作为模板扩增 Clock 编码区序列，并从 HindIIINA3.1 载体上，命名为 Clock Construct；另外，
k 过表达质粒 BamHI 和 HindIII 双酶切鉴定结果；BglII 和 KpnI 双酶切鉴定结果 结果验证的结合位点，构建仅包含 Cacna1c 启动子a1c promoter 质粒，将构建好的 Cacna1c promoter 质粒分别转染 293AD 细胞，结果显示，与阴性对照粒组的荧光素酶活性明显增加，说明构建的 Cacna1；将 Clock 过表达质粒与 Cacna1c promoter 质粒共转告基因结果显示，Clock 能够显著的增加 Cacna1c pa1c promoter 质粒中的结合位点进行突变，随后进一 Cacna1c promoter 突变质粒共转染，结果显示 Cmoter 质粒的转录活性明显减少，失去了对 Clock 的 Cacna1c promoter-444~-454 位点区域，并调控其转1.52.0VeClseActivity*
本文编号：3001295
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/nfm/3001295.html
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