ZNRF3对类风湿关节炎滑膜增殖和炎症的作用及其分子机制
发布时间：2021-01-28 14:45
一、研究背景类风湿关节炎（Rheumatoid arthritis,RA）是一种可发生于任何年龄的慢性自身免疫性疾病,主要临床表现为侵蚀性关节炎,基本病理表现为滑膜炎症、血管翳形成,关节软骨的侵蚀、骨的破坏,最终导致关节畸形和功能丧失。其发病机制目前尚不明确。成纤维样滑膜细胞（Fibroblast-like synoviocytes,FLS）在RA中数量病态性增加,凋亡减少,形成血管翳,侵蚀软骨,最终引起骨的破坏。在RA中,RA-FLS的激活是受多种信号通路影响,其中Wnt信号通路是近年来研究的热点,被认为在RA的发生发展中起到了非常重要的作用。锌指环指蛋白3（Zinc and ring finger 3,ZNRF3）是近年来发现的一种Wnt通路负反馈调控蛋白,其通过泛素化降解细胞膜表面Wnt蛋白受体卷曲蛋白（Frizzled,Fz）,起到抑制Wnt信号通路活性的作用。但是目前关于ZNRF3的研究多集中于肿瘤,RA中还没有ZNRF3的相关研究。因此,本课题观察比较了ZNRF3在RA患者滑膜组织中的表达,以及ZNRF3对于RA-FLS的生物学行为的影响,同时进行体内实验,观察了ZNRF3...
【文章来源】：中国人民解放军海军军医大学上海市 211工程院校
【文章页数】：140 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
组织标本分离(二)组织的固定、包埋与切片
原代FLS细胞
和 CD29 两种抗体。根据既往文献报道 CD90 是一项很好的鉴别 FLS 的标志物，它特异性表达于滑膜中的 FLS[31-33]，超过 70%的 FLS 上均有表达，可以用来区分 MLS 和FLS[31, 34, 35]。而 CD29 是人间充质干细胞（MSC）和 FLS 的共同标志物[36]，MSC 和FLS 目前尚未发现特异性标志物可以区分，但是 MSC 需要在特殊的培养条件下才可以生存，因此我们选用 CD29 进一步确定。若两者阳性率大于 90%，即可认为提取的细胞为较纯化的 FLS。结果如图 1-3，CD90 和 CD29 的双标阳性率为 93.2%。3、免疫荧光鉴定免疫荧光我们选择了 Vimentin 蛋白和 CD68 抗体。Vimentin 蛋白广泛存在于纤维细胞中，是 FLS 的阳性标志物，许多研究选用进行 FLS 的鉴别[37-39]。而 CD68 是巨噬细胞的特异性的表面标志物[40]，也是FLS 的阴性标志物，可以区分 FLS 和MLS。若 Vimentin 蛋白阳性而 CD68 阴性，则证明我们提取的是较为纯化的 FLS。结果见图 1-4。在荧光显微镜下观察呈红色荧光，绝大部分细胞表现为 Vimentin 蛋白阳性以及 CD68 阴性。
【参考文献】：
期刊论文
[1]TNF-α激活Wnt信号通路促进人结肠癌干细胞侵袭[J]. 魏笑,李昕,孔飞飞,马璐,隋御,陈冬梅,徐方. 细胞与分子免疫学杂志. 2018(11)
[2]2018中国类风湿关节炎诊疗指南[J]. Chinese Rheumatology Association;. 中华内科杂志. 2018 (04)
[3]白细胞介素-22促进类风湿关节炎成纤维化膜细胞的增殖[J]. 朱俊卿,王然,陈世贤,赵迪,李娟. 南方医科大学学报. 2017(12)
[4]hTRAIL对CIA大鼠滑膜增殖作用的影响[J]. 王领,赵福涛. 临床和实验医学杂志. 2017(17)
[5]类风湿性关节炎成纤维样滑膜（FLS）细胞中DDR2相互作用分子的筛选鉴定及其对FLS细胞侵袭能力的影响[J]. 刘楠楠,赵薇,穆楠,田菲,薛晓畅,颜真,张伟. 生物技术通讯. 2015(03)
[6]Annexin A2在类风湿性关节炎滑膜组织中的表达[J]. 陈扬. 上海医药. 2015(09)
[7]β-catenin在SD大鼠骨关节炎滑膜组织中的表达及意义[J]. 李建柱,李宽新,郭二鹏,史东,孙开军,王维山,史晨辉. 南京医科大学学报(自然科学版). 2015(02)
[8]Wnt信号通路与类风湿关节炎的关系[J]. 谢妮,何成松. 医学综述. 2015(01)
[9]基于Wnt信号通路的骨质疏松症分子靶向治疗研究进展[J]. 李玲慧,詹红生,丁道芳,陈博,杜国庆,宋奕. 中华内分泌代谢杂志. 2014 (08)
[10]全国多中心类风湿关节炎患者残疾及功能受限情况的调查[J]. 周云杉,王秀茹,安媛,李春,张晓盈,段天娇,朱佳鑫,李小峰,王莉枝,王彩虹,王永福,杨荣,王国春,卢昕,朱平,陈丽娜,靳洪涛,刘金婷,刘湘源,孙琳,陈海英,魏平,王俊祥,崔刘福,舒荣,刘白鹭,张卓莉,李光韬,李振彬,杨静,李俊芳,贾彬,张风肖,陶杰梅,韩淑玲,林金盈,韦美秋,刘晓敏,柯丹,胡绍先,叶丛,杨岫岩,李昊,黄慈波,高明,赖蓓,李兴福,宋立军,王轶,王晓元,穆荣,苏茵,栗占国. 中华风湿病学杂志. 2013 (08)
本文编号：3005179
【文章来源】：中国人民解放军海军军医大学上海市 211工程院校
【文章页数】：140 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
组织标本分离(二)组织的固定、包埋与切片
原代FLS细胞
和 CD29 两种抗体。根据既往文献报道 CD90 是一项很好的鉴别 FLS 的标志物，它特异性表达于滑膜中的 FLS[31-33]，超过 70%的 FLS 上均有表达，可以用来区分 MLS 和FLS[31, 34, 35]。而 CD29 是人间充质干细胞（MSC）和 FLS 的共同标志物[36]，MSC 和FLS 目前尚未发现特异性标志物可以区分，但是 MSC 需要在特殊的培养条件下才可以生存，因此我们选用 CD29 进一步确定。若两者阳性率大于 90%，即可认为提取的细胞为较纯化的 FLS。结果如图 1-3，CD90 和 CD29 的双标阳性率为 93.2%。3、免疫荧光鉴定免疫荧光我们选择了 Vimentin 蛋白和 CD68 抗体。Vimentin 蛋白广泛存在于纤维细胞中，是 FLS 的阳性标志物，许多研究选用进行 FLS 的鉴别[37-39]。而 CD68 是巨噬细胞的特异性的表面标志物[40]，也是FLS 的阴性标志物，可以区分 FLS 和MLS。若 Vimentin 蛋白阳性而 CD68 阴性，则证明我们提取的是较为纯化的 FLS。结果见图 1-4。在荧光显微镜下观察呈红色荧光，绝大部分细胞表现为 Vimentin 蛋白阳性以及 CD68 阴性。
【参考文献】：
期刊论文
[1]TNF-α激活Wnt信号通路促进人结肠癌干细胞侵袭[J]. 魏笑,李昕,孔飞飞,马璐,隋御,陈冬梅,徐方. 细胞与分子免疫学杂志. 2018(11)
[2]2018中国类风湿关节炎诊疗指南[J]. Chinese Rheumatology Association;. 中华内科杂志. 2018 (04)
[3]白细胞介素-22促进类风湿关节炎成纤维化膜细胞的增殖[J]. 朱俊卿,王然,陈世贤,赵迪,李娟. 南方医科大学学报. 2017(12)
[4]hTRAIL对CIA大鼠滑膜增殖作用的影响[J]. 王领,赵福涛. 临床和实验医学杂志. 2017(17)
[5]类风湿性关节炎成纤维样滑膜（FLS）细胞中DDR2相互作用分子的筛选鉴定及其对FLS细胞侵袭能力的影响[J]. 刘楠楠,赵薇,穆楠,田菲,薛晓畅,颜真,张伟. 生物技术通讯. 2015(03)
[6]Annexin A2在类风湿性关节炎滑膜组织中的表达[J]. 陈扬. 上海医药. 2015(09)
[7]β-catenin在SD大鼠骨关节炎滑膜组织中的表达及意义[J]. 李建柱,李宽新,郭二鹏,史东,孙开军,王维山,史晨辉. 南京医科大学学报(自然科学版). 2015(02)
[8]Wnt信号通路与类风湿关节炎的关系[J]. 谢妮,何成松. 医学综述. 2015(01)
[9]基于Wnt信号通路的骨质疏松症分子靶向治疗研究进展[J]. 李玲慧,詹红生,丁道芳,陈博,杜国庆,宋奕. 中华内分泌代谢杂志. 2014 (08)
[10]全国多中心类风湿关节炎患者残疾及功能受限情况的调查[J]. 周云杉,王秀茹,安媛,李春,张晓盈,段天娇,朱佳鑫,李小峰,王莉枝,王彩虹,王永福,杨荣,王国春,卢昕,朱平,陈丽娜,靳洪涛,刘金婷,刘湘源,孙琳,陈海英,魏平,王俊祥,崔刘福,舒荣,刘白鹭,张卓莉,李光韬,李振彬,杨静,李俊芳,贾彬,张风肖,陶杰梅,韩淑玲,林金盈,韦美秋,刘晓敏,柯丹,胡绍先,叶丛,杨岫岩,李昊,黄慈波,高明,赖蓓,李兴福,宋立军,王轶,王晓元,穆荣,苏茵,栗占国. 中华风湿病学杂志. 2013 (08)
本文编号：3005179
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