28个Joubert综合征家系的基因突变分析

发布时间：2021-01-31 14:45

　　目的:利用多种基因检测手段探究28个Joubert综合征家系的致病基因及变异位点。研究对象及方法:在全国范围内募集了 28个Joubert综合征家系（共29名患者）,对患者的病例资料进行汇总整理并对家系成员进行提取核酸。1.利用靶向基因组测序和全外显子组测序技术对患者基因组DNA进行高通量测序。2.利用生物信息学方法对二代测序数据进行比对、注释、过滤,挑选出可能致病的变异位点。3.利用Sanger测序对变异位点在患者及其直系亲属中进行验证。4.进行拷贝数变异分析检测样本可能存在的拷贝数变化并通过MLPA和Q-PCR的方法进行验证。5.利用RT-PCR的方法在cDNA水平上验证剪接位点对剪接的影响。结果:本实验为来自24个Joubert综合征家系的25例患者明确了致病基因和变异位点,占比86.2%,在两例患者中各找到一个位于已知致病基因杂合型的可能致病的变异位点,占比6.9%,两例患者的致病基因及位点尚未找到,占比6.9%。筛选出位于 CC2D2A、C5orf42、AHI1、ARMC9、CEP290、NPHP1、ARL13B、B9D2、CSPP1、INPP5E、PIBF1、RPGRIPI... 

【文章来源】：北京协和医学院北京市 211工程院校 985工程院校

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图２．纤毛疾病基因和表型的复杂交叠Ｍ??１．２?Ｊｏｕｂｅｒｔ综合征的研究进展??Ｊｏｕｂｅｒｔ综合征（Ｊｏｕｂｅｒｔｓｙｎｄｒｏｍｅ，简称ＪＳ，ＭＩＭ＃２１３３００）是纤毛病的典型代表，??

ｒｔ综合征是１９６９年由Ｊｏｕｂｅｒｔ［４４］及其同事首次在一个法裔－加拿妹发现的。这四个患者均存在认知障碍、共济失调、呼吸急蝴部发育不全的异常表型。随后在１９７７年，Ｂｏｌｔｓｈａｕｓｅｒ和Ｉｓｌｅｒ［４似临床症状的患者，并将具有相同或类似这种临床表型的这合征。后来随着医学技术的发展和磁共振成像技术应用到临察多数Ｊｏｕｂｅｒｔ综合征患者的临床病例后，Ｍａｒｉｅ［４６］发现在Ｊｏｕｂｅ振成像中存在普遍的异常现象，即因患者小脑蚓部发育不良现为中后脑连接部位呈现“磨牙征”的现象，随后将颅脑磁共”作为Ｊｏｕｂｅｒｔ综合征的特征性诊断标志。随着对Ｊｏｕｂｅｒｔ综合征ｒｔ综合征致病机制的不断探索，目前，己经有相对完善的Ｊｏｕｂｅｔ主要包括：：（１）颅脑磁共振成像显示为“磨牙征”，具体体现为间窝加深以及小脑上脚的抬高增粗；（２）患者存在不同程度的（３）存在婴幼儿时期的肌张力减退；（４）下列两项中至少存在一的呼吸节律异常（体现为呼吸急促和／或呼吸暂停或两种呼吸异眼运动异常（包括眼球震颤和／或眼球运动失能）［４７］。??Ｎｏｒｍａｌ?Ｃｌａｓｓｉｃ?ＭＴＳ??

图４．?Ｊｏｕｂｅｒｔ综合征基因突变分析的技术路线??２实验材料和方法??２．１实验设备??仪器设备?生产商???微量移液器（２．５，１０，１００，２００，１?ＯＯＯｐＬ）?Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ，Ｇｅｒｍａｎｙ??高压蒸汽灭菌锅（ＭＪＳ－５４Ａ）?施都凯仪器设备有限公司??恒温金属浴（ＨＢ－１００）?杭州博日科技有限公司??高速离心机（１－１４）?Ｓｉｇｍａ??核酸蛋白定量仪（Ｎａｎｏｄｒｏｐ?２０００Ｃ）?Ｔｈｅｒｍｏ?Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，??ＱｕｂｉｔＲ３．０?Ｆｌｕｏｒｏｍｅｔｅｒ?Ｌｉｆｅ?Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｕ．Ｓ．Ａ??Ｍｉｌｌｉ－Ｑ?Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ，?Ｕ．Ｓ．Ａ??

【参考文献】：
期刊论文
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本文编号：3011078