肝内窦道胰岛移植治疗小鼠糖尿病的实验研究
发布时间：2021-02-27 03:26
背景:自2000年埃德蒙顿方案提出以来,胰岛移植已取得了巨大成功,由于肝脏是具有双重血供并参与血糖调节的重要器官,临床上90%的胰岛移植是将胰岛经门静脉途径注入肝内。然而,通过门静脉途径进行胰岛移植存在一些缺陷,包括因立即血液介导的炎症反应（IBMIR）造成的早期移植物丢失、门静脉出血和肝脏栓塞的风险、不便于对移植物进行活检和影像监测等,这些问题促使了探索更加理想的替代胰岛移植部位的必要性。目的:1、探索构造小鼠肝内窦道作为胰岛移植部位的可行性;2、观察小鼠肝内窦道胰岛移植后糖尿病小鼠血糖变化情况。方法:1、通过胆总管逆行灌注胶原酶、水浴静止消化小鼠胰腺、Ficoll密度梯度离心结合手捡法纯化胰岛,采用双硫腙（DTZ）染色鉴定胰岛,吖啶橙-溴化乙锭（AO-EB）染色评价胰岛活性,葡萄糖刺激试验（GSIS）评估胰岛功能;2、利用链脲佐菌素（STZ）一次性腹腔注射法诱导建立糖尿病模型,在小鼠肝脏实质内临时性植入尼龙棒构造肝内窦道;3、通过胰岛移植后非禁食血糖值监测和腹腔葡萄糖耐量试验评估胰岛移植物功能;4、通过组织切片HE染色、Masson’s染色、免疫荧光或组化染色观察移植物组织形态学特...
【文章来源】：中国医科大学辽宁省
【文章页数】：57 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
小鼠胰岛分离纯化
图 2 小鼠胰岛葡萄糖刺激胰岛素释放实验结果糖 2.7mmol/L 和高糖 16.7mmol/L 培养基环境中3 讨论纯化是从事胰岛移植研究必备的一项入门培养、功能鉴定、移植等一系列实验研究步骤较为繁多，其中许多关键步骤对于初灌注情况、胶原酶的浓度、PH 和消化时间
图 3 小鼠肝内窦道的构造及其组织病理形态图 A 为尼龙棒的形态；图 B 显示尼龙棒成功植入后，肝叶无活动性出血及明显缺血改变；图 C 显示尼龙棒植入 28 天后再次开腹，腹腔内无明显粘连，小鼠肝左叶表面无坏死、脓肿等表现，尼龙棒位置无明显移位，透过肝脏被膜可见植入的尼龙棒的头端；图 D 显示通过撕裂局部肝脏被膜并拔出尼龙棒后，可形成内壁光滑的肝内窦道；图 E 为肝内窦道水平截面HE 染色，可见肝内窦道位于肝脏实质中，周围被肝血窦及正常形态的肝细胞环绕，图标长度代表 100μm；图 F 为肝内窦道水平截面 Masson’s 染色，可见肝内窦道壁内衬染成蓝色的胶原纤维，图标长度代表 100μm。3 讨论目前 1 型糖尿病诱导方法主要包括通过注射 STZ[45]和四氧嘧啶[46]两种药物，经
【参考文献】：
期刊论文
[1]经大网膜生物支架胰岛移植技术的探讨[J]. 王树森,裴广辉,王金山,刘尧娟,张博雅,邹家琦,刘蕾,淮明生,张雅敏,杨涛,王智平,郑虹,Xiumin Xu,Camillo Ricordi,沈中阳. 实用器官移植电子杂志. 2016(06)
[2]Gastric Submucosa Is Inferior to the Liver as Transplant Site for Autologous Islet Transplantation in Pancreatectomized Diabetic Beagles[J]. 尹注增,王树森,李强,黄莹,陈丽,陈刚,刘荣,王西墨. Journal of Huazhong University of Science and Technology（Medical Sciences）. 2016(04)
[3]一种小鼠胰岛经门静脉肝内移植方法及疗效评价[J]. 蒋煊,傅红兴,邱凯燕,何云强,徐艳艳,祝青卉. 肝胆胰外科杂志. 2016(02)
[4]猪小肠黏膜下层包被共培养后大鼠间充质干细胞对胰岛移植物的保护作用[J]. 王丹,丁小明,郑瑾,田晓辉,李杨,王晓红,宋焕锦,刘华,罗晓辉. 中华器官移植杂志. 2015 (12)
[5]猪胰岛移植于大鼠肝包膜下人工囊腔治疗糖尿病的研究[J]. 徐兵,吴林岚,杨晓梅,黄素钦,吴开木. 中华器官移植杂志. 2015 (02)
[6]胃黏膜下胰岛移植减轻移植物损伤的机制[J]. 尹注增,李佳昕,李强,黄莹,陈丽,王西墨. 中华肝胆外科杂志. 2014 (10)
[7]不同体重供体及理化因素对小鼠胰岛分离的影响[J]. 张梅,刘超,徐书杭,刘翠萍,徐瑜,徐宽枫. 南京医科大学学报(自然科学版). 2006(08)
[8]Islet transplantation for diabetic rats through the spleen[J]. Ying Cheng, Jia-Lin Zhang, Yong-Feng Liu, Tie-Min Li and Ning Zhao Shenyang, China Organ Transplant Unit, First Affiliated Hospital of China Medical University, Shenyang 110001, China. Hepatobiliary & Pancreatic Diseases International. 2005(02)
[9]胸腺内胰岛移植的实验研究[J]. 王国栋,陈规划. 中华器官移植杂志. 1999(01)
博士论文
[1]去细胞化的肝脏支架在细胞移植中的应用研究[D]. 王小军.第三军医大学 2013
本文编号：3053615
【文章来源】：中国医科大学辽宁省
【文章页数】：57 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
小鼠胰岛分离纯化
图 2 小鼠胰岛葡萄糖刺激胰岛素释放实验结果糖 2.7mmol/L 和高糖 16.7mmol/L 培养基环境中3 讨论纯化是从事胰岛移植研究必备的一项入门培养、功能鉴定、移植等一系列实验研究步骤较为繁多，其中许多关键步骤对于初灌注情况、胶原酶的浓度、PH 和消化时间
图 3 小鼠肝内窦道的构造及其组织病理形态图 A 为尼龙棒的形态；图 B 显示尼龙棒成功植入后，肝叶无活动性出血及明显缺血改变；图 C 显示尼龙棒植入 28 天后再次开腹，腹腔内无明显粘连，小鼠肝左叶表面无坏死、脓肿等表现，尼龙棒位置无明显移位，透过肝脏被膜可见植入的尼龙棒的头端；图 D 显示通过撕裂局部肝脏被膜并拔出尼龙棒后，可形成内壁光滑的肝内窦道；图 E 为肝内窦道水平截面HE 染色，可见肝内窦道位于肝脏实质中，周围被肝血窦及正常形态的肝细胞环绕，图标长度代表 100μm；图 F 为肝内窦道水平截面 Masson’s 染色，可见肝内窦道壁内衬染成蓝色的胶原纤维，图标长度代表 100μm。3 讨论目前 1 型糖尿病诱导方法主要包括通过注射 STZ[45]和四氧嘧啶[46]两种药物，经
【参考文献】：
期刊论文
[1]经大网膜生物支架胰岛移植技术的探讨[J]. 王树森,裴广辉,王金山,刘尧娟,张博雅,邹家琦,刘蕾,淮明生,张雅敏,杨涛,王智平,郑虹,Xiumin Xu,Camillo Ricordi,沈中阳. 实用器官移植电子杂志. 2016(06)
[2]Gastric Submucosa Is Inferior to the Liver as Transplant Site for Autologous Islet Transplantation in Pancreatectomized Diabetic Beagles[J]. 尹注增,王树森,李强,黄莹,陈丽,陈刚,刘荣,王西墨. Journal of Huazhong University of Science and Technology（Medical Sciences）. 2016(04)
[3]一种小鼠胰岛经门静脉肝内移植方法及疗效评价[J]. 蒋煊,傅红兴,邱凯燕,何云强,徐艳艳,祝青卉. 肝胆胰外科杂志. 2016(02)
[4]猪小肠黏膜下层包被共培养后大鼠间充质干细胞对胰岛移植物的保护作用[J]. 王丹,丁小明,郑瑾,田晓辉,李杨,王晓红,宋焕锦,刘华,罗晓辉. 中华器官移植杂志. 2015 (12)
[5]猪胰岛移植于大鼠肝包膜下人工囊腔治疗糖尿病的研究[J]. 徐兵,吴林岚,杨晓梅,黄素钦,吴开木. 中华器官移植杂志. 2015 (02)
[6]胃黏膜下胰岛移植减轻移植物损伤的机制[J]. 尹注增,李佳昕,李强,黄莹,陈丽,王西墨. 中华肝胆外科杂志. 2014 (10)
[7]不同体重供体及理化因素对小鼠胰岛分离的影响[J]. 张梅,刘超,徐书杭,刘翠萍,徐瑜,徐宽枫. 南京医科大学学报(自然科学版). 2006(08)
[8]Islet transplantation for diabetic rats through the spleen[J]. Ying Cheng, Jia-Lin Zhang, Yong-Feng Liu, Tie-Min Li and Ning Zhao Shenyang, China Organ Transplant Unit, First Affiliated Hospital of China Medical University, Shenyang 110001, China. Hepatobiliary & Pancreatic Diseases International. 2005(02)
[9]胸腺内胰岛移植的实验研究[J]. 王国栋,陈规划. 中华器官移植杂志. 1999(01)
博士论文
[1]去细胞化的肝脏支架在细胞移植中的应用研究[D]. 王小军.第三军医大学 2013
本文编号：3053615
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/nfm/3053615.html
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