AIM2炎症小体在高碘致NOD.H-2 h4 小鼠AIT模型中的作用及干预研究

发布时间：2021-03-09 05:03

　　目的:自身免疫甲状腺炎（Autoimmune thyroiditis,AIT）是由Th1淋巴细胞介导的器官特异性自身免疫性疾病,是遗传、环境等多因素共同作用所致的免疫稳态失衡。碘是AIT发病的重要环境因素之一,碘过量引起甲状腺免疫稳态失衡,但是碘过量致甲状腺自身免疫的始动环节和具体机制尚不明确。有研究表明,AIM2炎症小体在感染性疾病、肿瘤、炎症性疾病以及自身免疫疾病等方面起重要作用,也有研究证明多种炎症小体与AIT的发病有关,证实了AIM2炎症小体及其下游细胞因子可能代表AIT的潜在治疗靶点和生物标志物。本文旨在利用高碘诱导的NOD.H-2^h4小鼠AIT模型,探究AIM2炎症小体影响AIT发生发展的分子机制以及干预AIM2炎症小体对AIT的作用。研究方法:在NOD.H-2^h4小鼠甲状腺原位注射AIM2腺相关病毒,预防性阻断AIM2的表达,再以高碘饮水喂养小鼠,冰冻切片HE染色镜下观察小鼠甲状腺炎症和甲状腺肿是否有所缓解。ELISA检测TgAb的表达量,以判断AIT的发生情况,RT-PCR和WB检测甲状腺组织中AIM2炎症小体及其下游细胞因子... 

【文章来源】：中国医科大学辽宁省

【文章页数】：42 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

在甲状腺组织中AIM2的表达

中国医科大学硕士学位论文10在NOD.H-2h4小鼠4周龄时，高碘实验组在小鼠的甲状腺原位注射AIM2腺相关病毒，预防性地阻断甲状腺AIM2的表达，12周后检测对AIT的影响。高碘实验组小鼠甲状腺相对重量与高碘对照组相比未观察到明显差异（P=0.37），二组均高于正常碘组（P<0.01；P<0.01），说明高碘实验组甲状腺肿的情况并未缓解。甲状腺组织切片HE染色，显微镜下观察甲状腺组织炎症浸润情况并进行炎症评分，高碘实验组的小鼠甲状腺炎症评分（P=0.83）与高碘对照组相比无明显差异，二组均高于正常碘组（P<0.01；P<0.01），说明甲状腺炎症发生情况也没有得到明显缓解。酶联免疫吸附法测定小鼠血清中TgAb的浓度，高碘对照组较正常碘组有所增加（P=0.04），高碘实验组的小鼠TgAb浓度相对于高碘对照组有所降低，但没有明显差异（P=0.63）,相对于正常碘对照组也没有明显差异（P=0.13）。提示甲状腺自身免疫未得到明显改善，腺相关病毒特异性沉默甲状腺AIM2的表达并未缓解NOD.H-2h4小鼠的甲状腺肿的发生和甲状腺炎症严重程度。（表2，图3）表2.小鼠甲状腺原位注射AAV后甲状腺相关指标变化n甲状腺相对重量（1/10000）甲状腺评分血清TgAb浓度CON110.66±0.150.59±0.430.26±0.03H-CON93.16±1.053.00±1.090.39±0.17H-AIM2102.81±1.142.90±1.260.36±0.17P1<0.01<0.010.04P2<0.01<0.010.13P30.370.830.63(表示形式：均数±标准差，P1:CONv.s.H-CON;P2:CONv.s.H-AIM2;P3:H-CONv.s.H-AIM2)图3.小鼠甲状腺原位注射AAV后甲状腺相关指标变化

中国医科大学硕士学位论文11图4.甲状腺组织HE染色(光镜，×200)3.3小鼠甲状腺原位注射AAV-shRNA-AIM2沉默甲状腺AIM2的表达对脾脏Th1和Th17的影响高碘实验组在NOD.H-2h4小鼠4周龄时在甲状腺原位注射AIM2腺相关病毒，预防性地阻断甲状腺AIM2的表达，12周后检测对脾脏Th1和Th17的影响。提取小鼠脾脏单个核细胞，流式细胞术检测Th1细胞和Th17细胞的比例。与正常碘组相比，高碘对照组小鼠Th1细胞减少(P=0.04)，Th17细胞增加(P<0.01)；高碘实验组的Th1细胞和Th17细胞比例与正常碘组无明显差异(P=0.23；P=0.25)；高碘实验组较高碘对照组的Th17细胞比例下降(P<0.01)。说明甲状腺炎症发生时Th1细胞减少，Th17细胞增多，甲状腺原位沉默AIM2的表达可以降低Th17细胞的比例，但未观察到Th1细胞比例的明显变化。（表3，图5）A.炎症评分1分B.炎症评分2分C.炎症评分3分D.炎症评分4分


本文编号：3072295