Wnt3a在百草枯诱导肺上皮细胞上皮-间质转化中的作用研究
发布时间：2021-04-18 00:09
目的探讨Wnt3a在百草枯诱导肺上皮细胞上皮-间质转化中的作用及其分子机制。方法使用百草枯（Paraquat,PQ,50 μmol/L）诱导人肺泡上皮细胞（HBE）,采用Western Blot和q-PCR技术,检测上皮细胞标记物E-Cadherin、Occludin和成纤维细胞标记物α-SMA、Vimentin等蛋白的表达水平变化,验证百草枯诱导人肺泡上皮细胞上皮-间质转化（epithelial-mesenchymal transformation,EMT）模型的建立。使用Wnt3a人重组细胞因子（100μg/ml）诱导HBE,采用Western Blot和q-PCR技术,检测上皮细胞标记物E-cadherin、Occludin和成纤维细胞标记物α-SMA、Vimentin以及Wnt/β-catenin通路关键蛋白的表达水平,验证Wnt/β-catenin信号通路的激活。设计并构建针对Wnt3a的siRNA片段和阴性对照,转染HBE细胞,下调Wnt3a蛋白表达水平,同时采用百草枯诱导,检测E-cadherin、Occludin、α-SMA、Vimentin的表达水平,观察抑制Wnt3...
【文章来源】：南方医科大学广东省
【文章页数】：55 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图３－ｌ?Ａ：电子显微镜观察细胞形态；Ｂ：ｑ－ＰＣＲ检测上皮细胞标记物和成纤维细胞标记物表达??水平；ＣＷｅｓｔｅｍ?Ｂｌｏｔ检测上皮细胞标记物和成纤维细胞标记物表达水平??
????４．ｓｉＲＮＡ下调靶基因Ｗｎｔ３ａ表达水平，能够抑制ＰＱ激活的??Ｗｎｔ／ｐ－ｃａｔｅｎｉｎ信号通路，阻断ＰＱ诱导的ＥＭＴ进程??根据Ｗｎｔ３ａ的核酸序列，设计并构建Ｗｎｔ３ａ的特异性ｓｉＲＮＡ片段转染ＨＢＥ，??Ｗｅｓｔｅｒｎ?Ｂｌｏｔ检测结果显示，和阴性对照组相比，Ｗｎｔ３ａ－ｓｉＲＮＡ处理组Ｗｎｔ３ａ表??达水平显著下调（如图３－４所示），证明了靶向干扰Ｗｎｔ３ａ的效果。Ｗｅｓｔｅｒｎ?Ｂｌｏｔ??和ｑ－ＰＣＲ检测结果显示，和ＰＱ组对比，Ｗｎｔ３ａ－ｓｉＲＮＡ处理组Ｐ－ｃａｔｅｎｉｎ的表达??水平下降（如图３－５Ａ、图３－５Ｂ所示），表明Ｗｎｔ３ａ－ｓｉＲＮＡ能够抑制ＰＱ激活的??Ｗｎｔ／ｐ－ｃａｔｅｎｉｎ信号通路。同时，和ＰＱ组相比，Ｗｎｔ３ａ－ｓｉＲＮＡ组上皮细胞标志物??Ｅ－ｃａｄｈｅｒｉｎ表达水平升高，纤维细胞标志物ａ－ＳＭＡ、Ｖｉｍｅｎｔｉｎ的表达水平下降，??说明靶向下调Ｗｎｔ３ａ的表达水平（如图３－５Ａ、图３－５Ｂ所示），能阻断ＰＱ诱导??的ＥＭＴ进程。上述结果提示Ｗｎｔ／ｐ－ｃａｔｅｎｉｎ信号通路在百草枯诱导人肺泡上皮细??胞ＥＭＴ发生过程中起着重要的调控作用。??．?▲一－一??Ｗｎｔ３ａ（３９ｋＤａ）??ｐ－ａｃｔｉｎ（４２?ｋＤａ）?ｍｍｍ??图３－４靶向性干扰Ｗｎｔ３ａ的表达水平，验证ｓｉＲＮＡ的干扰效果??Ｆｉｇｕｒｅ?３－４?Ｔａｒｇｅｔｅｄ?ｉｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅ?ｗｉｔｈ?ｔｈｅ?ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｌｅｖｅｌ?ｏｆ?Ｗｎｔ３ａ?ｔｏ?ｖｅｒｉｆｙ?ｔｈｅ?ｉｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅ??ｅｆｆｅｃｔ?ｏｆ?ｓｉＲＮＡ??２０??
【参考文献】：
期刊论文
[1]甘草酸二铵对百草枯诱导肺泡上皮细胞Toll样受体4的影响[J]. 方辰,张剑锋,张伟,何丹,李霁. 中华急诊医学杂志. 2019 (04)
[2]MAPK信号通路在百草枯诱导上皮-间充质改变中的作用[J]. 朱晨笛,郭慕真,蔡倩,李颖颖,武坷鑫,黄敏. 中华劳动卫生职业病杂志. 2018 (08)
[3]百草枯通过调节Wnt/β-catenin信号通路促进肺泡上皮细胞上皮间质转化[J]. 赵春燕,刘畅,朱忠立,王晓芬,祝国芸,李福祥. 局解手术学杂志. 2017(11)
[4]调控Wnt信号通路对百草枯中毒大鼠肺纤维化的影响[J]. 黄晶,孙兆瑞,杨志洲,陈鑫,黄昌保,汪林,顾旭东,刘红梅,张炜,聂时南. 医学研究生学报. 2017(03)
[5]抑制Wnt/β-catenin信号通路对百草枯致肺纤维化影响的研究[J]. 孙兆瑞,赵扬,杨志洲,刘红梅,黄昌保,张炜,孙宝迪,陈鑫,黄晶,聂时南. 医学研究生学报. 2017(02)
[6]急性百草枯中毒5例分析[J]. 田英,王文生. 临床医药文献电子杂志. 2015(29)
[7]静态张应力作用下人牙周膜成纤维细胞β-catenin和Wnt3a蛋白的表达[J]. 侯镇婷,初金芝,张苗苗. 口腔医学研究. 2015(09)
[8]乳腺癌中α-SMA蛋白与MMP-3蛋白的表达及其生物学行为[J]. 赵晶洁,李建华,王洪,段庆华,赵志国,张学东. 临床与实验病理学杂志. 2015(05)
[9]百草枯检测方法的研究进展[J]. 陈珊珊,邓晓,刘景坤,李勤奋,武春媛. 农药. 2014(01)
[10]百草枯中毒致肺损伤的作用机制及治疗新进展[J]. 皮丽娟,祝伟,李树生. 内科急危重症杂志. 2013(04)
本文编号：3144404
【文章来源】：南方医科大学广东省
【文章页数】：55 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图３－ｌ?Ａ：电子显微镜观察细胞形态；Ｂ：ｑ－ＰＣＲ检测上皮细胞标记物和成纤维细胞标记物表达??水平；ＣＷｅｓｔｅｍ?Ｂｌｏｔ检测上皮细胞标记物和成纤维细胞标记物表达水平??
????４．ｓｉＲＮＡ下调靶基因Ｗｎｔ３ａ表达水平，能够抑制ＰＱ激活的??Ｗｎｔ／ｐ－ｃａｔｅｎｉｎ信号通路，阻断ＰＱ诱导的ＥＭＴ进程??根据Ｗｎｔ３ａ的核酸序列，设计并构建Ｗｎｔ３ａ的特异性ｓｉＲＮＡ片段转染ＨＢＥ，??Ｗｅｓｔｅｒｎ?Ｂｌｏｔ检测结果显示，和阴性对照组相比，Ｗｎｔ３ａ－ｓｉＲＮＡ处理组Ｗｎｔ３ａ表??达水平显著下调（如图３－４所示），证明了靶向干扰Ｗｎｔ３ａ的效果。Ｗｅｓｔｅｒｎ?Ｂｌｏｔ??和ｑ－ＰＣＲ检测结果显示，和ＰＱ组对比，Ｗｎｔ３ａ－ｓｉＲＮＡ处理组Ｐ－ｃａｔｅｎｉｎ的表达??水平下降（如图３－５Ａ、图３－５Ｂ所示），表明Ｗｎｔ３ａ－ｓｉＲＮＡ能够抑制ＰＱ激活的??Ｗｎｔ／ｐ－ｃａｔｅｎｉｎ信号通路。同时，和ＰＱ组相比，Ｗｎｔ３ａ－ｓｉＲＮＡ组上皮细胞标志物??Ｅ－ｃａｄｈｅｒｉｎ表达水平升高，纤维细胞标志物ａ－ＳＭＡ、Ｖｉｍｅｎｔｉｎ的表达水平下降，??说明靶向下调Ｗｎｔ３ａ的表达水平（如图３－５Ａ、图３－５Ｂ所示），能阻断ＰＱ诱导??的ＥＭＴ进程。上述结果提示Ｗｎｔ／ｐ－ｃａｔｅｎｉｎ信号通路在百草枯诱导人肺泡上皮细??胞ＥＭＴ发生过程中起着重要的调控作用。??．?▲一－一??Ｗｎｔ３ａ（３９ｋＤａ）??ｐ－ａｃｔｉｎ（４２?ｋＤａ）?ｍｍｍ??图３－４靶向性干扰Ｗｎｔ３ａ的表达水平，验证ｓｉＲＮＡ的干扰效果??Ｆｉｇｕｒｅ?３－４?Ｔａｒｇｅｔｅｄ?ｉｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅ?ｗｉｔｈ?ｔｈｅ?ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｌｅｖｅｌ?ｏｆ?Ｗｎｔ３ａ?ｔｏ?ｖｅｒｉｆｙ?ｔｈｅ?ｉｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅ??ｅｆｆｅｃｔ?ｏｆ?ｓｉＲＮＡ??２０??
【参考文献】：
期刊论文
[1]甘草酸二铵对百草枯诱导肺泡上皮细胞Toll样受体4的影响[J]. 方辰,张剑锋,张伟,何丹,李霁. 中华急诊医学杂志. 2019 (04)
[2]MAPK信号通路在百草枯诱导上皮-间充质改变中的作用[J]. 朱晨笛,郭慕真,蔡倩,李颖颖,武坷鑫,黄敏. 中华劳动卫生职业病杂志. 2018 (08)
[3]百草枯通过调节Wnt/β-catenin信号通路促进肺泡上皮细胞上皮间质转化[J]. 赵春燕,刘畅,朱忠立,王晓芬,祝国芸,李福祥. 局解手术学杂志. 2017(11)
[4]调控Wnt信号通路对百草枯中毒大鼠肺纤维化的影响[J]. 黄晶,孙兆瑞,杨志洲,陈鑫,黄昌保,汪林,顾旭东,刘红梅,张炜,聂时南. 医学研究生学报. 2017(03)
[5]抑制Wnt/β-catenin信号通路对百草枯致肺纤维化影响的研究[J]. 孙兆瑞,赵扬,杨志洲,刘红梅,黄昌保,张炜,孙宝迪,陈鑫,黄晶,聂时南. 医学研究生学报. 2017(02)
[6]急性百草枯中毒5例分析[J]. 田英,王文生. 临床医药文献电子杂志. 2015(29)
[7]静态张应力作用下人牙周膜成纤维细胞β-catenin和Wnt3a蛋白的表达[J]. 侯镇婷,初金芝,张苗苗. 口腔医学研究. 2015(09)
[8]乳腺癌中α-SMA蛋白与MMP-3蛋白的表达及其生物学行为[J]. 赵晶洁,李建华,王洪,段庆华,赵志国,张学东. 临床与实验病理学杂志. 2015(05)
[9]百草枯检测方法的研究进展[J]. 陈珊珊,邓晓,刘景坤,李勤奋,武春媛. 农药. 2014(01)
[10]百草枯中毒致肺损伤的作用机制及治疗新进展[J]. 皮丽娟,祝伟,李树生. 内科急危重症杂志. 2013(04)
本文编号：3144404
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