缺氧诱导因子-1α在糖尿病合并肺烟曲霉感染中的作用及机制研究

发布时间：2021-04-20 17:06

　　目的:烟曲霉是临床上最常见的机会性致病真菌之一,可在免疫功能低下的患者中引起致命的侵袭性曲霉病。糖尿病已成为曲霉菌感染的危险因素之一。糖尿病患者中侵袭性肺曲霉病的发生率甚至比免疫功能低下的患者更高。在高血糖状态下,感染会引起细胞因子的水平升高,而后者又会引起胰岛素抵抗,进而导致恶性循环,并加剧感染的严重程度。在烟曲霉感染部位通常会形成缺氧的微环境。作为缺氧环境的核心因素,转录因子缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）被激活并在抗真菌免疫和炎症反应中发挥重要作用。已有研究表明,在高血糖状态下,HIF-1α被抑制且能引发功能障碍。因此,HIF-1α的抑制作用可能是导致感染恶化的重要因素。但是机制仍不清楚。已有证据表明,HIF-1α在调节免疫和炎症中发挥着重要作用,其能够有效的帮助宿主防御感染。然而,HIF-1α信号转导在糖尿病患者合并肺烟曲霉菌感染中的作用仍是未知的。本研究课题旨在通过临床病例回顾性研究以及建立糖尿病合并肺烟曲霉菌感染小鼠模型来探究其感染特征并探讨HIF-1α在糖尿病合并肺烟曲霉菌感染中发挥作用的内在机制,进而为糖尿病患者合并肺烟曲霉菌感染的治疗提供新的理论依据。方法:1.探究... 

【文章来源】：中国医科大学辽宁省

【文章页数】：97 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
摘要
Abstract
英文缩略语
第一部分 :探究糖尿病合并肺烟曲霉菌感染的感染特点以及HIF-1α的表达情况
    1 前言
    2 材料和方法
        2.1 临床研究对象
        2.2 实验动物
        2.3 主要试剂和仪器
            2.3.1 主要试剂
            2.3.2 主要仪器
        2.4 溶液和药物配制
            2.4.1 实验药物
            2.4.2 免疫荧光实验溶液
            2.4.3 免疫印迹实验溶液
        2.5 实验方法
            2.5.1 临床回顾性研究数据纳入与分析
            2.5.2 糖尿病小鼠模型建立
            2.5.3 小鼠肺烟曲霉菌感染模型建立
            2.5.4 组织取材及切片
            2.5.5 肺组织匀浆菌落计数
            2.5.6 肺部烟曲霉菌抗原免疫荧光染色
            2.5.7 血清烟曲霉抗原检测
            2.5.8 HE染色步骤
            2.5.9 血清炎症因子检测
            2.5.10 肺组织HIF-1α蛋白表达情况检测
            2.5.11 统计学方法
    3 结果
        3.1 临床回顾性研究分析结果
            3.1.1 两组患者基础情况的对比分析
            3.1.2 不同因素对住院时长的影响
            3.1.3 多因素分析
        3.2 实验小鼠一般情况观察
        3.3 实验小鼠孢子清除能力评估
            3.3.1 肺组织匀浆菌落计数
            3.3.2 肺组织烟曲霉抗原免疫荧光染色
            3.3.3 血清烟曲霉抗原ELISA检测
        3.4 实验小鼠炎症反应情况评估
            3.4.1 肺组织炎症细胞浸润情况
            3.4.2 血清炎症因子表达情况
        3.5 肺组织HIF-1α表达情况
    4 讨论
    5 结论
第二部分 :HIF-1α在糖尿病小鼠合并肺烟曲霉菌感染中的作用及可能机制探讨
    1 前言
    2 材料和方法
        2.1 实验动物
        2.2 主要试剂和仪器
            2.2.1 主要试剂
            2.2.2 主要仪器
        2.3 溶液和药物配制
        2.4 实验方法
            2.4.1 糖尿病小鼠模型的建立
            2.4.2 建立小鼠肺烟曲霉菌感染模型
            2.4.3 DMOG给药模式
            2.4.4 组织取材及切片
            2.4.5 肺组织匀浆菌落计数
            2.4.6 肺部烟曲霉菌抗原免疫荧光染色
            2.4.7 血清烟曲霉抗原检测
            2.4.8 HE染色步骤
            2.4.9 血清炎症因子检测
            2.4.10 肺组织HIF-1α蛋白表达情况检测
            2.4.11 肺组织转录组测序
            2.4.12 统计学方法
    3 结果
        3.1 肺组织HIF-1α表达情况
        3.2 实验小鼠一般情况观察
        3.3 实验小鼠孢子清除能力评估
            3.3.1 肺组织匀浆菌落计数
            3.3.2 肺组织烟曲霉抗原免疫荧光染色
            3.3.3 血清烟曲霉抗原ELISA检测
        3.4 实验小鼠炎症反应情况评估
            3.4.1 肺组织炎症细胞浸润情况
            3.4.2 血清炎症因子表达情况
        3.5 肺组织转录组测序结果分析
    4 讨论
    5 结论
第三部分 :高糖在缺氧环境下对烟曲霉孢子诱导人THP-1 巨噬细胞HIF-1α激活的影响及其下游信号通路的初步研究
    1 前言
    2 材料和方法
        2.1 实验细胞
        2.2 主要试剂和仪器
            2.2.1 主要试剂
            2.2.2 主要仪器
        2.3 溶液和药物配制
            2.3.1 实验药物
            2.3.2 细胞培养液配制
            2.3.3 免疫印迹实验溶液
        2.4 实验方法
            2.4.1 细胞复苏培养
            2.4.2 PMA诱导分化THP-1 细胞
            2.4.3 烟曲霉孢子悬液制备
            2.4.4 急性高糖刺激
            2.4.5 烟曲霉孢子与THP-1巨噬细胞低氧共培养
            2.4.6 高糖培养细胞的药物处理
            2.4.7 巨噬细胞HIF-1α、NLRP3 蛋白表达情况检测
            2.4.8 细胞培养上清IL-1β的ELISA法测定
            2.4.9 流式细胞技术检测T细胞分化比例
            2.4.10 统计学方法
    3 结果
        3.1 巨噬细胞中HIF-1α以及NLRP3 炎症小体信号通路表达情况
        3.2 Th细胞以及Treg细胞的分化情况
        3.3 DMOG与 Alum的应用对HIF-1α以及NLRP3 炎症小体的影响
        3.4 DMOG与 Alum对 Th及 Treg细胞分化的影响
    4 讨论
    5 结论
对本研究创新性的自我评价
参考文献
综述
    参考文献
攻读学位期间取得的研究成果
致谢
个人简历


【参考文献】：
期刊论文
[1]Pulmonary Immune Responses to Aspergillus Fumigatus in Rats[J]. MIRKOV Ivana,EL-MUZGHI Amal Atia Mhfuod,DJOKIC Jelena,NINKOV Marina,POPOV ALEKSANDROV Aleksandra,GLAMOCLIJA Jasmina,KATARANOVSKI Milena.  Biomedical and Environmental Sciences. 2014(09)



本文编号：3150072