纳米药物递送靶向BTK小干扰RNA用于类风湿性关节炎治疗的研究

发布时间：2021-04-29 07:13

　　类风湿性关节炎是一种长期发作的与慢性炎症相关的自身免疫病。目前的治疗策略主要是抑制疾病发生过程中的过强免疫反应,如利用小分子免疫抑制剂氨甲喋呤、来氟米特,或是采用近年来兴起的抗体疗法如阿达木单抗等抑制炎症反应,从而缓解疾病的症状。但长期使用上述治疗方法所导致全身性免疫抑制会致使治疗后期感染风险增加,因而开发新的类风湿性关节炎的治疗策略成为一项挑战。小干扰RNA（small-interfering RNA,siRNA）作为一种有效的基因沉默手段,在近年来受到越来越多的关注和使用,但与此同时,siRNA的应用也存在着重大的问题,如其在体内易被核酸酶降解等。实验室之前开发了一种利用聚乙二醇-聚乳酸-羟基乙酸共聚物（PEG-b-PLGA）辅以阳离子脂质（如DOTAP和BHEM-Chol等）,通过两次乳化法包载siRNA的方法,将包载的纳米颗粒成功递送至靶细胞并沉默相关基因的表达。这一阳离子脂质辅助的纳米颗粒已在多种疾病模型中取得了较好的治疗效果。布鲁顿氏酪氨酸激酶（BTK）在B细胞的成熟和巨噬细胞的炎症反应中起着重要作用。有研究表明,通过小分子抑制剂抑制B细胞与巨噬细胞中的BTK表达,能有效的... 

【文章来源】：中国科学技术大学安徽省 211工程院校 985工程院校

【文章页数】：73 页

【学位级别】：硕士

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摘要
ABSTRACT
第一章 绪论
    1.1 siRNA的发现与作用机制
    1.2 siRNA药物的优势与面临的挑战
        1.2.1 siRNA药物的优势
        1.2.2 siRNA药物面临的挑战
    1.3 siRNA药物递送系统
        1.3.1 阳离子细胞穿透肽
        1.3.2 树枝状载体
        1.3.3 聚合物载体
        1.3.4 脂质类载体
    1.4 B细胞、巨噬细胞的功能与疾病
        1.4.1 B细胞的发育与功能
        1.4.2 B细胞的功能与疾病
        1.4.3 巨噬细胞的功能与疾病
    1.5 布鲁顿氏酪氨酸激酶(Bruton's tyrosine kinase,BTK)
    1.6 类风湿性关节炎(Rheumatoid Arthritis,RA)
    1.7 本课题的选题目的及主要研究内容
    参考文献
第二章 实验材料与实验方法
    2.1 实验材料
        2.1.1 聚合物材料及脂质
        2.1.2 主要试剂
        2.1.3 主要设备
        2.1.4 实验小鼠
    2.2 实验方法
        2.2.1 递送siRNA纳米颗粒的制备
        2.2.2 递送siRNA纳米颗粒性质的表征
        2.2.3 纳米颗粒中siRNA回收率和包载率检测
        2.2.4 纳米颗粒稳定性检测
        2.2.5 纳米颗粒对siRNA保护检测
        2.2.6 RAW264.7细胞培养
        2.2.7 骨髓来源巨噬细胞(bone-marrow-derived macrophages,BMDMs)培养
        2.2.8 小鼠脾脏细胞培养
        2.2.9 流式细胞术(FACS)检测纳米颗粒在不同脏器中的B细胞、巨噬细胞和中性粒细胞中的分布
        2.2.10 血液中淋巴细胞的分离
        2.2.11 腹腔灌洗液中淋巴细胞的分离
        2.2.12 淋巴结中淋巴细胞的分离
        2.2.13 脾脏中淋巴细胞的分离
        2.2.14 FACS检测B细胞对纳米颗粒的体外摄取
        2.2.15 FACS检测巨噬细胞对纳米颗粒的体外摄取
        2.2.16 共聚焦显微镜(CLSM)观察RAW264.7细胞对纳米颗粒的体外摄取
        2.2.17 RAW264.7细胞体外敲低BTK实验检测
        2.2.18 BMDM体外敲低BTK实验检测
        2.2.19 脾脏中B细胞体外敲低BTK实验检测
        2.2.20 体内敲低BTK实验检测
        2.2.21 小鼠类风湿性关节炎模型的构建
        2.2.22 小鼠类风湿性关节炎模型的治疗与检测
第三章 结果与讨论
    3.1 表面不同表面特性纳米颗粒库的构建
    3.2 筛选不同特性纳米颗粒在B细胞、巨噬细胞和中性粒细胞中的分布
    3.3 筛选得到的纳米颗粒进一步表征
    3.4 B细胞与巨噬细胞对包载Cy5-siRNA纳米颗粒(CLAN_(Cy5-siRNA))的体外摄取
    3.5 CLAN_(siBTK)体外敲低B细胞与巨噬细胞中BTK表达
    3.6 CLAN_(siBTK)体外敲低模拟炎症环境中巨噬细胞BTK的表达
    3.7 B细胞与巨噬细胞对CLAN_(Cy5-siRNA)的体内摄取
    3.8 CLAN_(siBTK)体内敲低B细胞与巨噬细胞中BTK表达
    3.9 CLAN_(siBTK)缓解小鼠类风湿性关节炎症状
    3.10 结论
参考文献
附录一 主要溶液配制
附录二 常规实验方法
致谢
在读期间发表的学术论文与取得的其他研究成果



本文编号：3167094