薯蓣皂苷阻抑矽尘促发的MRL/lpr小鼠系统性红斑狼疮发生发展的作用机制研究

发布时间：2021-05-15 22:49

　　目的:至今为止,世界上仍有数以百万计的人群暴露于矽尘环境,矽尘主要经呼吸道进入肺脏,可导致不可逆的矽肺病,其主要以肺部炎症、矽结节和肺部纤维化为主要特点。然而,更让人们不能忽视的是,接触游离性二氧化硅还可以促发机体产生各种类型的自身免疫性疾病。据统计,矽尘暴露者易并发系统性红斑狼疮（SLE）、Caplan综合征、类风湿性关节炎（RA）等自身免疫性疾病。矽尘暴露引发自身免疫性疾病的发病机制,目前仍不十分清楚。新近研究发现,免疫细胞的异常凋亡和LC3相关吞噬作用（LAP）,在自身免疫性疾病的发病机制中发挥重要作用。本研究应用矽尘暴露的MRL/lpr狼疮小鼠模型探讨机体免疫细胞凋亡及LAP在矽尘促发自身免疫性疾病中的作用及薯蓣皂苷阻抑矽尘促发的系统性红斑狼疮发生发展的作用机制,这将为该类疾病的预防与治疗提供新的实验基础和理论依据。研究方法:本研究通过非暴露式气管灌注二氧化硅悬液,构建MRL/lpr小鼠矽尘暴露模型,以同样的方法构建对照组模型,并给予实验小鼠80 mg/kg的薯蓣皂苷（dioscin）或羧甲基纤维素钠（CMC-Na）。本研究将实验动物分为生理盐水组（saline+CMC-Na）... 

【文章来源】：中国医科大学辽宁省

【文章页数】：64 页

【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
英文缩略语
1 前言
2 材料和方法
    2.1 主要试剂和仪器
        2.1.1 主要试剂
        2.1.2 主要仪器
    2.2 主要试剂的配置
        2.2.1 10 %水合氯醛
        2.2.2 1%红细胞裂解液
        2.2.3 4%多聚甲醛
        2.2.4 1%多聚甲醛
        2.2.5 10×电泳缓冲液(Westernblotrunningbuffer)
        2.2.6 10×转膜液(Westernblottrans-buffer)
        2.2.7 10 ×TBS
        2.2.8 1%TBST
        2.2.9 封闭液
        2.2.10 1%杂交液
        2.2.11 10%SDS溶液
        2.2.12 完全细胞培养基
    2.3 研究对象与分组
        2.3.1 实验动物
        2.3.2 动物分组及模型的建立
    2.4 小鼠样品的取留
        2.4.1 小鼠尿液的收集
        2.4.2 小鼠血清的收集
        2.4.3 小鼠肺泡灌洗液(Bronchoalveolarlavagefluid,BALF)的制备
        2.4.4 小鼠肺组织样本的取留
        2.4.5 脾细胞单细胞悬液制备
        2.4.6 肾脏组织悬液制备
    2.5 组织学检测
        2.5.1 苏木素伊红染色(hematoxylin-eosinstaining,HE)
        2.5.2 免疫荧光染色(Immunofluorescence,IF)
    2.6 小鼠BALF中炎性细胞涂片
        2.6.1 小鼠BALF中炎性细胞涂片
    2.7 自身抗体检测
        2.7.1 酶联免疫吸附试验(enzyme-linkedimmunosorbentassay,ELISA)
    2.8 肾功能检测
        2.8.1 考马斯亮蓝法(Bradford法)测定尿蛋白
        2.8.2 肌氨酸氧化酶法测定肌酐
        2.8.3 尿蛋白肌酐比值
    2.9 细胞计数和流式细胞术检测
        2.9.1 细胞计数
        2.9.2 流式细胞术
    2.10 蛋白定量和Westernblot检测
        2.10.1 蛋白定量
        2.10.2 westernblot检测
    2.11 总RNA提取和Real-timePCR检测
        2.11.1 总RNA提取
        2.11.2 mRNA逆转录获得cDNA
        2.11.3 Realtime-PCR检测
    2.12 统计学分析
3 实验结果
    3.1 薯蓣皂苷可减轻矽尘暴露的狼疮倾向小鼠的肺部炎症
    3.2 薯蓣皂苷可降低矽尘暴露的狼疮倾向小鼠血清中自身抗体水平
    3.3 薯蓣皂苷可改善矽尘暴露的狼疮倾向小鼠肾脏功能,减轻肾脏炎症及免疫复合物沉积
        3.3.1 薯蓣皂苷可降低矽尘暴露的狼疮倾向小鼠尿蛋白肌酐比值及血清肌酐水平
        3.3.2 薯蓣皂苷可减轻矽尘暴露的狼疮倾向小鼠肾脏炎症和免疫复合物的沉积
    3.4 薯蓣皂苷可降低矽尘暴露的狼疮倾向小鼠机体免疫细胞的凋亡水平,促进肾脏免疫细胞LAP功能
        3.4.1 薯蓣皂苷可降低矽尘暴露的狼疮倾向小鼠机体免疫细胞的凋亡水平
        3.4.2 薯蓣皂苷可促进矽尘暴露的狼疮倾向小鼠肾脏免疫细胞LAP功能
4 讨论
5 结论
本研究创新性的自我评价
参考文献
文献综述
    参考文献
攻读学位期间取得的研究成果
致谢
个人简历


【参考文献】：
期刊论文
[1]Traditional Chinese herbal extracts inducing autophagy as a novel approach in therapy of nonalcoholic fatty liver disease[J]. Cong Liu,Jia-Zhi Liao,Pei-Yuan Li.  World Journal of Gastroenterology. 2017(11)



本文编号：3188474