桥本甲状腺炎患者外周血miRNAs表达谱及miR-125a-5p作用机制的研究

发布时间：2021-05-17 04:00

　　目的:通过二代高通量测序技术,对桥本甲状腺炎（Hashimoto’s thyroiditis,HT）患者外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclear cells,PBMCs）miRNAs的表达谱进行分析,运用生物信息学方法预测分析,筛选出与HT发病相关的miRNAs进行验证,并进一步研究其调控机制;探讨miRNA作为HT潜在生物标志物可能性,为HT的临床诊治提供新思路。方法:1、运用二代高通量测序技术分别检测5例HT患者和5例健康志愿者PBMCs中的RNA并构建测序文库,利用生物信息学进行计算分析得出,获得miRNAs差异表达谱。2、从miRNAs的表达谱中挑选出与HT发病机制可能相关且具有一定研究价值的六个miRNAs,扩大样本量,通过实时荧光定量PCR（real-time quantitative reverse transcription polymerase chain reaction,qRT-PCR）技术验证测序结果。3、运用基因本体论（Gene Ontology,GO）和Kyoto Encyclopedia of Genes and Geno... 

【文章来源】：江苏大学江苏省

【文章页数】：98 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
abstract
主要英文缩略词
第一章 绪论
    1.1 桥本甲状腺炎
        1.1.1 桥本甲状腺炎简介
        1.1.2 桥本甲状腺炎的发病机制
    1.2 Th1 细胞
        1.2.1 Th细胞分类
        1.2.2 Th1 细胞的分化与功能
        1.2.3 Th1 细胞与自身免疫性疾病
    1.3 miRNA
        1.3.1 miRNA的合成及生物学功能
        1.3.2 miRNA与免疫系统
        1.3.3 miRNA与自身免疫性疾病
    1.4 高通量测序
    1.5 本研究的目的、方法、实验设计及意义
        1.5.1 研究目的
        1.5.2 研究方法
        1.5.3 实验设计
        1.5.4 研究意义
第二章 桥本甲状腺炎与健康对照组之间差异表达的miRNA表达谱的构建与分析
    2.1 实验材料及仪器
        2.1.1 研究对象
        2.1.2 主要仪器
        2.1.3 材料和试剂
        2.1.4 主要溶液配制
    2.2 实验方法
        2.2.1 人外周血单个核细胞分离
        2.2.2 PBMCs中的总RNA的提取
        2.2.3 RNA质量检测及RNA文库质控
        2.2.4 miRNA测序文库及测序
        2.2.5 miRNA高通量测序及数据分析
    2.3 实验结果
        2.3.1 RNA样本质控结果
        2.3.2 高通量测序结果
    2.4 讨论
第三章 HT患者与健康志愿者中差异表达的miRNAs的表达验证
    3.1 实验材料及仪器
        3.1.1 研究对象
        3.1.2 主要仪器
        3.1.3 主要试剂及材料
        3.1.4 试剂配制
    3.2 实验方法
        3.2.1 分离外周血单个核细胞
        3.2.2 qRT-PCR检测PBMC中 miRNAs的表达
        3.2.3 数据的统计分析
    3.3 实验结果
        3.3.1 HT患者与健康志愿者之间差异表达miRNAs
        3.3.2 qRT-PCR检测差异表达的miRNAs在 PBMCs中相对表达量
    3.4 讨论
第四章 HT患者与健康志愿者之间差异表达的miRNAs的生物学功能研究的预测
    4.1 实验方法
    4.2 实验结果
        4.2.1 HT患者中差异表达的miRNAs的靶基因的GO分析
        4.2.2 HT患者中差异表达的miRNAs靶基因的KEGG Pathway分析
    4.3 讨论
第五章 桥本甲状腺炎患者miR-125a-5p作用机制的研究
    5.1 实验材料及仪器
        5.1.1 研究对象
        5.1.2 miRNAs靶向关系预测软件
        5.1.3 细胞株及菌种
        5.1.4 主要仪器
        5.1.5 主要试剂及材料
        5.1.6 主要溶液配制
    5.2 实验方法
        5.2.1 预测和筛选miRNAs的调控的靶基因
        5.2.2 分离外周血单个核细胞
        5.2.3 FCM检测Th1 细胞亚群
        5.2.4 qRT-PCR检测PBMC中 MAF、IFNG的表达
        5.2.5 分选人外周血PBMCs中的CD4+细胞
        5.2.6 细胞转染
        5.2.7 荧光素酶报告载体的构建
        5.2.8 Dual-Luciferase报告基因检测
        5.2.9 qRT-PCR检测甲状腺组织中miR-125a-5p、IFNG、MAF的表达水平
        5.2.10 血清中TgAb、TPOAb的检测
        5.2.11 统计学分析
    5.3 实验结果
        5.3.1 miRNAs靶基因的预测
        5.3.2 HT组与健康对照组外周血PBMC中的MAF表达情况
        5.3.3 双荧光素酶报告分析miR-125a-5p与 MAF的相互作用
        5.3.4 外周血PBMCs中 miR-125a-5p对 MAF的调控作用
        5.3.5 HT患者与健康志愿者PBMCs中 Th1 细胞比例变化
        5.3.6 HT患者与健康志愿者PBMCs中 IFNG mRNA相对表达量
        5.3.7 HT患者PBMCs中 miR-125a-5p表达水平与Th1 细胞比例及相关因子相关性分析
        5.3.8 健康志愿者外周血CD4+细胞中miR-125a-5p对 Th1 细胞的调控作用
        5.3.9 HT患者中miR-125a-5p与甲状腺自身抗体的关系
        5.3.10 局部甲状腺组织标本中miR-125a-5p、MAF及 IFNG表达情况
        5.3.11 miR-125a-5p在 HT中的潜在诊断价值
    5.4 讨论
结论
参考文献
致谢
硕士期间发表论文



本文编号：3191028