LncRNA AK085865差异调控巨噬细胞极化在过敏性哮喘中的作用研究

发布时间：2021-05-22 00:59

　　目的:本项目中,我们拟探索lncRNA AK085865在小鼠过敏性哮喘模型中对气道炎症、气道重塑和气道高反应性的影响,进一步深入探讨AK085865在体内环境中调控巨噬细胞极化对过敏性哮喘小鼠的影响,旨在阐明AK085865在过敏性哮喘小鼠模型中的作用及其细胞免疫学机制,从而为过敏性哮喘的发病机制研究和生物学防治提供新的理论基础和实验依据。方法:（1）分组:6-8周龄的雌性野生型C57BL/6小鼠随机分成PBS组,WT-Df1组,6-8周龄的雌性基因敲除小鼠则分为KO-Df1组;（2）造模:WT-Df1组与KO-Df1组采用尘螨蛋白（Dermatophagoidesfarinae1,Df1）联合雾化攻击的方法诱导C57BL/6小鼠建立过敏性哮喘模型,而PBS组则给予PBS致敏及雾化;（3）检测:采用荧光定量PCR检测哮喘小鼠肺泡灌洗液（Bronchoalveolar lavage fluid,BALF）细胞及肺组织中lncRNA AK085865表达水平;通过HE及PAS染色观察各组小鼠组织病理学变化,比较各组小鼠气管周围炎症细胞浸润水平和气道重塑水平;通过小鼠肺功能仪,观察各组小鼠... 

【文章来源】：皖南医学院安徽省

【文章页数】：76 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
前言
第一部分 Lnc RNAAK085865 调控巨噬细胞极化对过敏性哮喘模型的易感性
    1.实验动物、试剂和仪器
        1.1 实验动物
        1.2 实验相关试剂
        1.3 实验仪器
        1.4 常规试剂配制与造模试剂配制
        1.5 实验方法
            1.5.1 构建小鼠哮喘模型
            1.5.2 Lnc RNAAK085865 基因敲除小鼠鉴定
            1.5.3 肺组织病理学检查
            1.5.4 肺泡灌洗液细胞和肺组织匀浆及单细胞悬液获取
            1.5.5 Lnc RNAAK085865 在气道组织中表达水平检测
            1.5.6 野生型与基因敲除小鼠气道高反应性检测
            1.5.7 野生型与基因敲除小鼠气道组织炎性细胞检测
            1.5.8 野生型与基因敲除小鼠气道组织中炎性细胞因子检测
            1.5.9 统计学分析
        1.6 研究结果
            1.6.1 过敏性哮喘模型构建成功
            1.6.2 Lnc RNAAK085865 参与到Df1 诱导的过敏性哮喘的发病过程中
            1.6.3 Lnc RNAAK085865 基因敲除鼠构建成功
            1.6.4 Lnc RNAAK085865 敲除减轻了过敏性哮喘小鼠肺组织炎症
            1.6.5 Lnc RNAAK085865 敲除减轻了过敏性哮喘小鼠气道高反应性
            1.6.6 Lnc RNAAK085865 敲除降低了过敏性哮喘小鼠气道组织中炎症细胞表达水平
            1.6.7 Lnc RNAAK085865 敲除降低了过敏性哮喘小鼠气道组织中炎症细胞因子的表达
    讨论
    结论
第二部分 Lnc RNAAK085865 基因敲除对过敏性哮喘小鼠系统和局部细胞免疫应答的影响
    2.实验动物、试剂和仪器
        2.1 实验动物
        2.2 实验相关试剂
        2.3 实验仪器
        2.4 常规试剂配制与造模试剂配制
        2.5 实验方法
            2.5.1 Lnc RNAAK085865 基因敲除小鼠鉴定
            2.5.2 构建小鼠哮喘模型
            2.5.3 流式检测野生型和基因敲除哮喘小鼠气道组织中巨噬细胞表达水平
            2.5.4 q RT-PCR检测野生型和基因敲除哮喘小鼠气道组织中巨噬细胞相关标志物
            2.5.5 小鼠骨髓来源的巨噬细胞培养
            2.5.6 小鼠骨髓来源的巨噬细胞鉴定
            2.5.7 巨噬细胞过继回输实验
            2.5.8 流式检测哮喘小鼠II型固有淋巴样细胞(ILC2s)的表达谱变化
            2.5.9 流式检测野生型和基因敲除哮喘小鼠气道组织中固有淋巴样细胞群(ILCs)表达水平
            2.5.10 流式检测野生型和基因敲除哮喘小鼠气道组织中ILC2s分泌的Th2型细胞因子(IL-4/5/13)
            2.5.11 统计学分析
        2.6 研究结果
            2.6.1 Lnc RNAAK085865 敲除降低了哮喘小鼠气道组织中巨噬细胞数量水平
            2.6.2 Lnc RNAAK085865 敲除降低了哮喘小鼠气道组织中巨噬细胞相关基因标志物的表达
            2.6.3 小鼠体外诱导巨噬细胞的鉴定
            2.6.4 Lnc RNAAK085865 敲除是减轻过敏性哮喘炎症程度的关键因素
            2.6.5 哮喘小鼠气道组织中II型固有淋巴样细胞(ILC2s)表面分子检测
            2.6.6 Lnc RNAAK085865 敲除减少了哮喘小鼠气道组织中固有淋巴样细胞群(ILCs)的含量
            2.6.7 Lnc RNAAK085865 敲除降低了哮喘小鼠气道组织中ILC2s分泌的Th2型细胞因子(IL-4/5/13)的水平
    技术路线图
    讨论
    结论
参考文献
综述
    参考文献
作者简介及读研期间主要科研成果
致谢



本文编号：3200677