初步探讨P-糖蛋白过表达对胰岛β细胞生物表型影响的机制

发布时间：2021-05-22 04:19

　　目的:课题组前期实验结果表明P-gp（P-glycoprotein,P-gp）过表达能增加大鼠胰岛β细胞株（INS-1）高糖刺激下胰岛素的分泌,并不影响胰岛素的生物合成,但其中的具体机制尚不清楚。本研究在进一步探讨P-gp过表达促进INS-1细胞胰岛素分泌的机制的同时,通过构建大鼠胰岛β细胞特异性P-gp过表达模型,观察体内环境中P-gp过表达对胰岛β细胞分泌、分化、增殖以及凋亡的影响。方法:（1）实验对象为INS-1细胞和SD大鼠胰岛;（2）INS-1细胞:将Ad-abcb1b腺病毒和阴性对照病毒以浓度50×106/m L在无血清培养基中感染INS-1细胞4小时后,换成正常含有胎牛血清的培养基,置于培养箱继续孵育44小时;（3）用弱RIPA萃取细胞总蛋白,胞浆/胞膜蛋白提取试剂盒萃取细胞膜蛋白和浆蛋白,Western Blot法检测P-gp、L型钙离子通道蛋白（Cav1.2）、小窝蛋白-1（CAV1）、PKA、CREB、SNAP25、STX1A、SYT1、p-CREB、GAPDH、Tublin等相关蛋白的表达;（4）应用染色质免疫沉淀（Ch IP）方法检测CREB与Cav1.2启动子... 

【文章来源】：天津医科大学天津市 211工程院校

【文章页数】：77 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
中文摘要
Abstract
缩略语/符号说明
前言
    研究现状、成果
    研究目的、方法
一、P-糖蛋白过表达促进INS-1 细胞分泌的机制研究
    1.1 对象和方法
        1.1.1 研究对象
        1.1.2 实验试剂和仪器
        1.1.3 实验方法
    1.2 结果
        1.2.1 P-gp过表达对Cav1.2 表达的影响
        1.2.2 P-gp过表达对CAV1、SNAP25 及其之间的相互作用的影响
    1.3 讨论
        1.3.1 P-gp过表达对INS-1 细胞Cav1.2 及胰岛素分泌的影响
        1.3.2 P-gp调节Cav1.2 表达的机制
        1.3.3 P-gp通过CAV1、SNAP25 及其之间的相互作用调节INS-1 细胞胰岛素的分泌
    1.4 小结
二、P-糖蛋白过表达对INS-1 和胰岛β细胞分化的影响
    2.1 对象和方法
        2.1.1 研究对象
        2.1.2 实验试剂和仪器
        2.1.3 实验方法
    2.2 结果
        2.2.1 转基因大鼠基因鉴定结果
        2.2.2 P-gp过表达对INS-1 细胞分化的影响
        2.2.3 P-gp过表达对胰岛β细胞分化的影响
    2.3 讨论
    2.4 小结
三、P-糖蛋白过表达对大鼠胰岛增殖、凋亡、分泌的影响
    3.1 对象和方法
        3.1.1 研究对象
        3.1.2 实验试剂和仪器
        3.1.3 实验方法
    3.2 结果
        3.2.1 P-gp过表达对大鼠胰岛素分泌的影响
        3.2.2 P-gp过表达对大鼠胰岛素增殖、凋亡的影响
    3.3 讨论
    3.4 小结
结论
参考文献
发表论文和参加科研情况说明
综述
    综述参考文献
致谢
个人简历


【参考文献】：
期刊论文
[1]Comparative identification of Ca～（2+） channel expression in INS-1 and rat pancreatic β cells[J]. Fei Li,Zong-Ming Zhang,Department of General Surgery, Digestive Medical Center,The First Affiliated Hospital,Medical School,Tsinghua University,Beijing 100016,China.  World Journal of Gastroenterology. 2009(24)



本文编号：3200969