雌二醇介导SIRT1-FOXO3a对成骨细胞自噬的作用和机制研究

发布时间：2021-06-17 02:49

　　目的探讨雌激素是否能通过增强SIRTl的活性进而对成骨细胞及其通路产生作用。方法 17β-雌二醇（17β-E2）作用于h FOB1.19成骨细胞24 h,应用荧光自噬检测试剂盒（MDC）检测成骨细胞自噬情况;应用蛋白免疫印迹技术检测自噬相关蛋白LC3的表达含量;应用蛋白免疫印迹技术检测AMPK、磷酸化的AMPK、SIRTl蛋白活性的影响;在17β-E2环境中,增强或抑制SIRTl的活性,通过电镜、激光共聚焦显微镜、流式细胞仪观察细胞形态和关键蛋白质的改变;应用免疫印迹技术及实时定量PCR检测17β-E2/SIRT1/AMPK/FOXO3a对细胞自噬相关蛋白BCL-2、Bnip3、m TOR及凋亡相关蛋白caspase-3的影响。结果 17β-E2（10-8mmol/L,10-6mmol/L）增加成骨细胞的自噬,成骨细胞内LC3II蛋白活性增加;随着17β-E2浓度的增加,SIRTl蛋白表达量增加,且活性增强; 17β-E2增加磷酸化AMPK的水平,且AMPK可以增加成骨细胞内SIRTl的活性; SIRTl激动剂SRT1720及抑制剂Ex527可以干预17β-E2/SIRTl对成骨细胞细... 

【文章来源】：中国骨质疏松杂志. 2020,26(12)北大核心CSCD

【文章页数】：9 页

【部分图文】：

17β-E2对成骨细胞内LC3II蛋白活性的作用

MDC检测17β-E2对成骨细胞自噬的影响

在体外细胞胞实验中，用SRT1720(SIRT1激活剂)或Ex527(SIRT1抑制剂)预处理细胞2 h，并添加了10-6mmol/L 17β-E2作用24 h，来观察SIRT1活性的增强和减弱对17β-E2中成骨细胞自噬的影响。本研究用免疫荧光抗体标记自噬相关蛋白LC3B蛋白(绿)，DAPI染色剂染细胞核(蓝)，并用激光共聚焦显微镜观察细胞自噬(图5 A)。与空白对照组相比，10-6mmol/L17β-E2可以增强自噬相关蛋白LC3的表达，而SRT1720可以强化17β-E2此作用(P<0.05)。图4 17β-E2/SIRT1对细胞内AMPK蛋白活性的影响。


本文编号：3234308