胰岛β细胞特异性敲除PDHA1基因对细胞形态及功能影响的相关探究

发布时间：2021-06-27 11:20

　　研究背景糖尿病（Diabetes mellitus,DM）是世界性的公共卫生问题,其患病率与患病人数的快速增长,已严重威胁人类的健康与寿命。目前的研究认为,糖尿病主要是由β细胞质量减少、胰岛素分泌缺乏和（或）胰岛素作用障碍引起的代谢性疾病,近些年来,线粒体参与的能量代谢逐渐被人们所认知。线粒体功能障碍可导致β细胞质量和功能受损,以及胰岛素抵抗等,但具体调节机制错综复杂,可能与代谢耦合、氧化应激、钙离子代谢紊乱、线粒体生物合成下降、线粒体自噬等因素相关。但具体发病机制病仍在研究和探索中。丙酮酸脱氢酶复合体（pyruvate dehydrogenase complex,PDHc）是线粒体功能的重要调控元件,可介导丙酮酸不可逆氧化为乙酰辅酶a,通过三羧酸循环影响β细胞胰岛素分泌。PDHc主要由丙酮酸脱氢酶（E1）,二氢硫辛酰胺转移酶（E2）、二氢硫辛酰胺脱氢酶（E3）以及几种辅助因子构成。其中由PDHA1基因编码的E1亚单位是调控丙酮酸脱氢酶复合体最重要的组成部分,催化酶可通过调节E1亚单位上3个丝氨酸位点的磷酸化及去磷酸化来影响PDHc的活性,进而调控丙酮酸的代谢。既往研究表明,2型糖尿病... 

【文章来源】：南方医科大学广东省

【文章页数】：75 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图１?ｄｂ／ｄｂ小鼠胰岛中ＰＤＨＡ?１蛋白比正常小鼠表达量减低（绿色代表分泌胰岛素的ｐ细胞，??红色代表表达ＰＤＨＡ１的细胞，蓝色代表细胞核）??

的相对ｍＲＮＡ表达量。通过结果发现，与ｐＫＯ组小鼠相比，ＮＣ组小鼠在胰岛??中ＰＤＨＡｌｍＲＮＡ的相对表达量明显下降（＊＊Ｐ＜０．０１），而在肝脏和脂肪组织等??外周组织中，ＰＤＨＡ１?ｍＲＮＡ的相对表达量差异并不明显（Ｐ＞０．５）（见图３－３）。??说明ＰＫＯ组小鼠ＰＤＨＡ１基因在胰腺（３细胞中转录水平降低，其ｍＲＮＡ的相对??表达量明显减少；且ＰＤＨＡ１基因的敲除效果存在特异性，并不影响其他组织（如??肝脏和脂肪组织）中ＰＤＨＡ１?ｍＲＮＡ的表达状态。??Ａ?Ｂ??－１．５－１?＿?１．５－，??；?＊＊?；??＜?Ｉ?１?＜?—Ｔ—??Ｈ?Ｅｉｉｓｐｉ?ｒ?°－?ｌｉｌＳｌｉｉ??｜圍?＿Ｓ＿＿＿??Ｉ?°＇５＇?ｌｉｌｌｌｌ??ｕｕ?益?００?丨?｜＿鐵纖翁！?＾??ＮＣ?（３ＫＤ?ＮＣ?（３?ＫＯ??ｉｓｌｅｔｓ?ｌｉｖｅｒ??ｃ??＿?１．５－１??０）??＞??＜??ｉ?１．０－?，?■—?Ｔ￣＂ｒ，??°?〇．５－?ｉｉｉｉｉｉ??ＮＣ?ｐＫＯ??ａｄｉｐｏｓｅ??图３－３．敲除组与对照组小鼠胰岛（Ａ）、肝脏（Ｂ）及脂肪组织（Ｃ）中ＰＤＨＡｌ?ｍＲＮＡ的相??３４??

?颂士学位论文???对表达量。（＊＊ｐ＜０．０１）??Ｆｉｇｕｒｅ?３－３．?ｑＰＣＲ?ａｎａｌｙｓｉｓ?ｏｆ?ｉｓｌｅｔ＾Ａ），?ｌｉｖｅｒ（Ｂ），?ａｎｄ?ａｄｉｐｏｓｅ?ｔｉｓｓｕｅｓ（Ｃ）?ｆｒｏｍ?ｐ?ｃｅｌｌ?ｋｎｏｃｋｏｕｔ?ｍｉｃｅ??ａｎｄ?ｃｏｎｔｒｏｌ?ｇｒｏｕｐｓ?（＊＊ｐ?＜?０．０１）??３．２．３免疫印迹法（Ｗｅｓｔｅｒｎ?Ｂｌｏｔ）检测小鼠胰腺中ＰＤＨＡｌ蛋白含量的表达情况??取出在液氮中保存的ＰＫＯ组和ＮＣ组小鼠胰腺组织，研磨至粉末，加入Ｒ１ＰＡ??裂解液提取组织总蛋白。通过Ｗｅｓｔｅｒｎ?Ｂｌｏｔ检测两组小鼠胰腺中ＰＤＨＡＩ蛋白的??表达是否有差异，利用灰度值进行统计学分析。结果如图３－３所示，（３ＫＯ组小??鼠胰腺中ＰＤＨＡ１蛋白表达量较ＮＣ组下降（＊＊Ｐ＜０．０１）。??？＞?１．５－１?＊＊??ｃ??

【参考文献】：
期刊论文
[1]Expression of pyruvate dehydrogenase is an independent prognostic marker in gastric cancer[J]. Xu-Ren Sun,Zhe Sun,Zhi Zhu,Hai-Xia Guan,Chen-Yan Li,Jun-Yan Zhang,Yi-Ning Zhang,Huan Zhou,Hui-Jing Zhang,Hui-Mian Xu,Ming-Jun Sun.  World Journal of Gastroenterology. 2015(17)



本文编号：3252746