BRD4在类风湿性关节炎骨破坏中的作用机制研究

发布时间：2021-07-09 18:11

　　目的:探讨表观遗传分子—溴结构域蛋白4（bromodomain-containing protein 4,BRD4）对类风湿性关节炎（Rheumatoid arthritis,RA）骨破坏的影响。本研究首先通过对人类RA和骨性关节炎（Osteoarthritis,OA）的关节滑膜组织中BRD4表达的比较;然后再通过RA小鼠模型,探讨BRD4在RA关节骨质破坏中的作用以及机制,从而进一步阐明RA骨破坏的病理机制以及为其治疗提供理论基础。方法:本实验首先通过HE染色及免疫组化技术检测RA与OA滑膜组织形态和BRD4表达分布。然后再通过Western-Blot检测BRD4在RA与OA滑膜表达是否存在差异。建立胶原诱导关节炎小鼠模型（Collagen-induced arthritis,CIA）,并将小鼠随机分为3组:对照组（CONT）、关节炎模型组（CIA）、关节炎干预组（CIA+JQ1）。采用qRT-PCR和Western-blot技术检测小鼠滑膜组织中BRD4的表达;应用HE染色观察小鼠关节中骨质破坏差异,应用VG染色及酸性磷酸酶染色（Tartrate Resistant Acid Ph... 

【文章来源】：青岛大学山东省

【文章页数】：53 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

OA与RA患者滑膜组织HE染色及OA和RA患者滑膜组织免疫组化结果（×400）

结果9图2BRD4蛋白在RA滑膜与OA滑膜的表达A：滑膜组织BRD4的Western-blot结果B：滑膜组织BRD4的蛋白表达分析（*表示与OA组比较，P<0.05）讨论RA属于自身免疫性疾病，其主要特征是滑膜炎症和增生、自身抗体产生、软骨和骨破坏等[12]。OA是以关节软骨退变为主要病理改变退化疾病，表现为不同程度的关节软骨丢失、骨质增生、和滑膜炎等。两者都有滑膜炎症状改变，滑膜炎可导致关节骨的局部侵蚀，使骨吸收与骨形成之间的平衡受到干扰，导致净骨质流失。BRD4是BET家族中普遍存在的蛋白，可识别组蛋白尾巴上赖氨酸残基的N-乙酰化，在调各种基因的转录延伸中起着关键作用[13]。越来越多的研究报道了BRD4在炎性疾病的病理学中的重要作用。相关研究表明，BET抑制剂可抑制类风湿关节炎滑膜成纤维细胞中炎性基因和基质降解酶的表达[14]。Jiang等[15]研究证实BRD4可以正调控高迁移率族蛋白B（highmobilitygroupbox-B,HMGB）进而影响细胞核因子κB（Nuclearfactorkappa-B，NF-κB）信号传导，从而影响OA的关节软骨细胞的炎症反应。本研究中首先运用HE染色分别对滑膜组织的形态和炎症细胞的表达差异进行观察再通过免疫组化和免疫印迹对BRD4的表达进行定位和定量检测。证实BRD4

实验结果19再通过WesternBlot对对照组和模型组在滑膜组织中BRD4蛋白表达进行检测。以GAPDH作为内参，将条带灰度值的差异来作为表达量的差异。结果显示：与对照组相比，模型组中BRD4表达显著升高，差异具有统计学意义（P<0.01）（图3B和C）。图3小鼠滑膜组织BRD4相关表达结果A：BRD4的mRNA水平；B：BRD4蛋白的Western-blot结果；C：BRD4的蛋白表达分析（*表示与对照组比较，P<0.05；**表示与对照组比较P<0.01）


本文编号：3274234