褪黑素通过SIRT1介导的抗氧化机制调控骨质疏松症防治的研究

发布时间：2021-07-12 21:12

　　目的:研究褪黑素（MT）在骨质疏松症（OP）防治中的作用,通过整合骨外科学、干细胞技术、氧化自由基医学等学科知识,深入阐明MT调控骨质疏松防治的抗氧化相关机制,为促进骨质疏松症的预防和治疗提供新的手段。方法:取8周龄Sprague-Dawley雌性大鼠,构建去卵巢（OVX）大鼠骨质疏松模型,3个月后提取正常和OVX大鼠股骨骨髓间充质干细胞（BMMSCs）进行培养,传代至第2代进行检测。确认骨质疏松情况下BMMSCs增殖、成骨和抗氧化等能力的变化。体外细胞实验通过1μM和100μM浓度的MT干预OP-BMMSCs,CCK-8检测细胞增殖,茜素红染色检测骨基质矿化以及RT-PCR检测成骨相关基因（RUNX2,SP7,BGLAP）探究激动SIRT1对OP-BMMSCs增殖和成骨能力的影响,通过相关试剂盒检测胞内活性氧（ROS）、超氧化物、过氧化氢（H2O2）浓度,总超氧化物歧化酶（SOD）、SOD2和过氧化物酶活力,RT-PCR检测抗氧化基因表达以及WesternBlot检测抗氧化蛋白表达（SOD1,SOD2,CAT,GPX1,SIRT1）来探究MT对改变OP-BMMSCs抗氧化能力的作用。... 

【文章来源】：苏州大学江苏省 211工程院校

【文章页数】：70 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图１：摘除ＯＶＸ组大鼠的双侧卵巢

第一部分?褪黑素通过ＳＩＲＴ１介导的抗氧化机制调控骨质疏松症防治的研究??３．?ＢＭＭＳＣｓ的体外分离培养及细胞培养??在无菌条件下，将大鼠股骨分离，成功将含有少量骨髓的细胞悬液接种到培养瓶??中，２小时后可见有少数细胞开始贴壁。４８小时吸出培养液并ＰＢＳ清洗２遍，去除??上层悬浮骨髓和细胞，加入新培养液后显微镜下见贴壁细胞形态良好，呈单个生长或??克隆样生长，０Ｐ组和Ｎｏｒｍａｌ组细胞形态未见明显区别。之后每３天规律换液，待细??胞融合至８０？９０％时，用０．２５％Ｔｒｙｐｓｉｎ－ＥＤＴＡ消化细胞并按１：?２比例进行传代。取??第２代（Ｐ２）细胞用于实验。多余细胞冻存于液氮中，供之后使用。??Ｎｏｒｍａｌ?ＯＰ??ｙ?＾?ＴＶ，?Ｖ?／?／?？??？?＾?■?？?￡?ｉ?、?．?＇?／?Ｖ?■?、?？??ｔ?一?‘?＼?＇、？?４?／?＼＼＼?＾??ｉ?、入?ｒ?、？?Ｖ＇?’?：、二?Ｌ、”：－??ｍｍｍ?－．－，■■■■??图３：体外分离后培养的ＢＭＭＳＣｓ，Ｎｏｒｍａｌ组和ＯＰ组细胞在Ｐ２代时在细胞形态上??无明显差别。标尺＝１００?（ｉｍ。??４．细胞增殖检测??将Ｎｏｒｍａｌ组和ＯＰ组的细胞，按ｌＯＯＯｃｅｌｌ／孔的密度接种于９６孔板中，分别在第??１、３、５、７天，采用ＣＣＫ－８检测细胞增殖能力。从第３天开始就可以发现，ＯＰ组??细胞的增殖能力明显小于Ｎｏｒｍａｌ组。在第７天的时候，ＯＰ组细胞的增殖能力较??Ｎｏｒｍａｌ?组下降了?１７．５％。??１２??

图４：与Ｎｏｒｍａｌ－ＢＭＭＳＣｓ相比，ＯＰ－ＢＭＭＳＣｓ的增殖能力显著下降

【参考文献】：
期刊论文
[1]中国老年骨质疏松症诊疗指南（2018）[J]. 马远征,王以朋,刘强,李春霖,马迅,王拥军,邓廉夫,贺良,杨乃龙,陈伯华,邱贵兴,朱汉民,陶天遵,秦岭,王亮,程晓光.  中国骨质疏松杂志. 2018(12)
[2]骨质疏松症中国白皮书[J]. EditorialBoardofOsteoporosisPreventionandTreatment(ChinaWhitePaper),ChinaHealthPromotionFoundation.  中华健康管理学杂志. 2009(3)



本文编号：3280669