2型糖尿病患者外周血单个核细胞NLRP3炎性体mRNA表达和炎性因子水平与动脉粥样硬化相关性研究

发布时间：2017-04-30 15:06

  本文关键词：2型糖尿病患者外周血单个核细胞NLRP3炎性体mRNA表达和炎性因子水平与动脉粥样硬化相关性研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：背景动脉粥样硬化(AS)是一种发达国家的主要致死疾病。随着人们生活水平提高和饮食习惯改变,该病也成为国内主要致死疾病之一。AS是血管壁慢性炎性病变,其发病机制尚未完全阐明,炎性细胞因子学说是AS致病的主要学说之一,炎性细胞因子广泛参与炎症的发生、发展,在AS中具有重要的作用和意义。发现新的炎性细胞因子,明确炎性细胞因子与AS的关系,对疾病的早期诊断、血管病变风险评估、细胞因子靶向性治疗等具有重要意义。2型糖尿病(T2DM)患者易并发AS等大动脉病变。本研究通过检测T2DM合并AS患者的外周血液中单个核细胞(PBMCs)中NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白(NLRP)3炎性体mRNA表达和白介素(IL)-18、IL-1β等炎性因子水平,并分析各组患者数据间的关系,探讨NLRP3炎性体与T2DM患者并发AS的相关性。NLRP3作为NLRPs蛋白家族中的典型代表,除通过富含亮氨酸的重复序列(LRR)识别其配体胞壁酰二肽(MDP)之外,还可以通过LRR结合识别尿酸、三磷酸腺苷(ATP)、内毒素和细胞裂解产物等活化NLRP3炎性体的信号通路,产生炎症反应。国内关于NLRP3与AS相关性的研究仍然较少,在国外有报道认为NLRP3炎性体是一种新型的胆固醇代谢和炎症之间的介质,在由胆固醇晶体引起的AS进展中发挥重要作用。也有研究发现炎症因子与ApoE基因敲除的小鼠模型的AS的发展没有相关性。因此,炎症因子在AS中的作用还存在分歧。炎症因子与糖尿病的发展也密切相关,炎症因子与糖尿病及血管性疾病相关性的研究已成为热点,对炎症因子与糖尿病并发AS发生、发展相关性的研究有着非常重要的意义。目的探讨NLRP3炎性体mRNA表达和IL-18、IL-1B水平与T2DM合并CAS的相关性。方法招募107例T2DM患者、35例非T2DM的颈动脉粥样硬化(CAS)患者和35例健康体检者用于本研究。根据华盛顿大学CAS斑块超声分级标准将107例T2DM患者分为单纯T2DM组(n=26)、T2DM轻度斑块组(n=32)、T2DM中度斑块组(n=38)和T2DM严重斑块组(n=11)。另选非T2DM的CAS患者作为单纯CAS组(n=35),以及体检健康者作为正常对照组(n=35)。建立实时荧光聚合酶链反应法(RT-FQ-PCR)检测NLRP3炎性体mRNA的方法学,并通过探针稳定性、检测灵敏度、检测特异性和检测重复性四个方面对其进行评价,用于检测各组PBMCs中NLRP3炎性体1nRNA表达水平,葡萄糖氧化酶-过氧化物酶偶联法用于测定空腹血糖,酶法用于检测血清总胆固醇和血清甘油三脂,双试剂直接测定匀相法用于检测高密度脂蛋白胆固醇和低密度脂蛋白胆固醇,酶联免疫吸附试验法用于检测IL浓度。SPSS 18.0软件用于统计学分析各组差异及患者PBMCs中NLRP3炎性体mRNA的表达及IL-18、IL-1β浓度与CAS斑块严重程度的相关性。结果1.方法学评价1.1探针稳定性不包含引物的PCR反应体系扩增30个循环后,未出现荧光信号,说明探针稳定无异常断裂。1.2检测灵敏度NLRP3炎性体mRNA 和 β-actin mRNA扩增结果显示,CT值均在15-25的范围内,反应情况良好。1.3检测特异性PCR扩增产物经2.0%琼脂糖凝胶电泳,可见DNA marker 50-100 bp之间出现4个平行的单一条带,与目的片段84 bp、85 bp、76 bp和80 bp的长度相符。1.4检测重复性取正常对照组和T2DM合并CAS三小组样本各一份,重复测定10次,批内CV%值分别为3.21%、3.68%、3.24%和3.55%；连续测定10天,批间CV%值分别为3.26%、3.75%、3.53%和3.90%。2.T2DM患者PBMCs中NLRP3炎性体mRNA表达水平与CAS的相关性2.1各病理组患者外周血中NLRP3炎性体mRNA表达水平均高于正常对照组(P0.05), T2DM合并CAS组NLRP3 mRNA和Caspase-1 mRNA表达水平显著高于单纯T2DM和单纯CAS组(P0.01)；T2DM合并CAS组ASC mRNA表达水平显著高于单纯CAS组(P0.01)。2.2T2DM各斑块组[LRP3 mRNA. ASC mRNA 和 Caspase-1 mRNA均高表达,并且两两正相关,即NLRP3 mRNA与ASC mRNA的表达水平呈正相关(r=0.61,P0.01),与Caspase-1 mRNA的表达水平亦呈正相关(r=0.52,P0.05),ASCmRNA与Caspase-1 mRNA的表达水平呈正相关(r=0.70,P0.01)。2.3 T2DM合并CAS轻度、中度和严重斑块组NLRP3 mRNA表达呈逐渐递减趋势,即NLRP3 mRNA表达与斑块厚度呈显著负相关(r=-0.70,P0.01)；ASCmRNA表达轻度斑块组中度斑块组严重斑块组,即ASC mRNA表达与T2DM患者CAS斑块厚度呈负相关(r=-0.43,P0.05); Caspase-1 mRNA表达同样呈下调趋势,并与CAS斑块厚度呈显著负相关(r=-0.47,P0.01)3.IL-18和IL-1B相关性研究各斑块组中IL-18和IL-1β的浓度均高于正常对照组,并与NLRP3炎性体mRNA表达量呈正相关,即IL-18和IL-113的浓度与NLRP3 mRNA表达呈正相关(r=0.70,P0.01和r=0.76,P0.01),与ASC mRNA表达呈正相关(r=0.69,P0.01和r=0.77,P0.01),与Caspase-1 mRNA表达也呈正相关(r=0.70,P0.01和r=0.74,P0.01)；但IL-1β和IL-18浓度与CAS斑块厚度无相关性(r=0.07,P0.05和r=0.26,P0.05)。结论1. RT-FQ-PCR具有快速、准确的特点。其对NLRP3炎性体mRNA的检测稳定、特异性和重复性好,提供的实验数据可靠。2. T2DM合并CAS患者NLRP3炎性体mRNA高表达,并且在CAS斑块形成初期相对表达量最高,随着CAS斑块的逐渐成熟,表达渐趋沉寂。NLRP3炎性体mRNA高表达与T2DM患者合并CAS的发生、发展相关。3. T2DM合并CAS患者血液中炎性因子IL-18和IL-1β浓度升高,并与NLRP3炎性体mRNA表达正相关。炎性因子IL-18和IL-1β浓度增加与T2DM患者合并CAS的发生、发展相关。
【关键词】：2型糖尿病 颈动脉粥样硬化 外周血单个核细胞 NLRP3炎性体mRNA IL-18 IL-1β
【学位授予单位】：长江大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R587.2
【目录】：

• 中文摘要4-7
• Abstract7-12
• 第1章 绪论12-16
• 第2章 材料和方法16-27
• 2.1 对象与分组16
• 2.2 本研究相关的常规检查及IL-18和IL-1 β浓度的检测方法16-20
• 2.3 NLRP3炎性体mRNA的检测20-26
• 2.4 统计学处理26-27
• 第3章 实验结果27-33
• 3.1 常规检测结果27
• 3.2 RT-FQ-PCR检测结果27-30
• 3.3 IL-18和IL-1β的浓度检测结果30-33
• 第4章 讨论33-36
• 4.1 T2DM并发CAS患者NLRP3炎性体mRNA的表达33-34
• 4.2 IL-18和IL-1β浓度变化与T2DM合并CAS的相关性34-36
• 第5章 结论36-37
• 致谢37-38
• 参考文献38-43
• 综述43-50
• 参考文献47-50
• 个人简介50-51

【共引文献】

中国博士学位论文全文数据库 前5条

1 吕敏;中老年自然人群颈动脉粥样硬化现况调查暨传统心血管病危险因素与颈动脉粥样硬化的关系[D];中国协和医科大学;2004年

2 程红;补肾活血化痰方对动脉粥样硬化斑块易损性影响的研究[D];广州中医药大学;2009年

3 赵珊珊;通脉地仙丸对动脉粥样硬化斑块内血管新生及其稳定性影响的研究[D];广州中医药大学;2010年

4 张卫斌;补肾活血化痰法对动脉粥样硬化斑块炎性因子的干预研究[D];广州中医药大学;2010年

5 邢洁;罗陆一学术思想和通脉地仙丸对冠心病心绞痛的临床研究[D];广州中医药大学;2011年

  本文关键词：2型糖尿病患者外周血单个核细胞NLRP3炎性体mRNA表达和炎性因子水平与动脉粥样硬化相关性研究，，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：337068