AMHRⅡ、INSR基因DNA甲基化与PCOS表观遗传学研究

发布时间：2017-05-01 02:08

  本文关键词：AMHRⅡ、INSR基因DNA甲基化与PCOS表观遗传学研究，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：多囊卵巢综合征(Polycystic ovary syndrome,PCOS)是指女性青春期发病,以月经紊乱、持续排卵障碍和卵巢多囊样改变,合并高雄激素血症(Hyperandrogenism,HA)和高胰岛素血症(Hyperinsulinemia,HI)为主要临床特征的生殖功能障碍与代谢异常并存的内分泌紊乱综合症。PCOS临床表现多样化,表现为高度异质性和家族聚集现象。目前有关PCOS病因和发病机理研究有诸多报道,但其病因和确切发病机制仍不清楚。尤其是PCOS发病表现为家族聚集性,诸多学者认为遗传因素在PCOS病因学方面起重要作用。近年研究热点关注表观遗传学领域,PCOS所致高雄激素血症及胰岛素血症这两大分泌特征以及其相关基因的研究引起学者更多的关注,从表观遗传学进行研究报道较少。抗苗勒管激素(Anti-müllerian hormone,AMH)是卵巢颗粒细胞分泌的一种局部调节因子,目前研究发现其与卵泡生长发育有重要作用,AMH对PCOS局部病理变化的研究主要集中在因卵巢局部调节因子的表达与调控异常而导致的一系列病理生理改变,而不同患者表现出较大差异。研究表明,AMH主要通过其相应的受体(主要是其II型受体)发挥其相应的生物学作用,表现出旁分泌局部调节参与系列的代谢途径。抗苗勒管II型受体(Anti-müllerian hormone receptor II,AMHRII)在PCOS卵巢局部和子宫内膜病理变化中作用的研究鲜有报道,其在PCOS发生过程中的分子遗传作用机制尚无描述。高胰岛素血症是PCOS的另一重要病理生理特征之一,主要表现为临床上的胰岛素抵抗(Insulin resistance,IR)近期的研究发现PCOS患者卵巢局部及子宫内膜等均存在着胰岛素抵抗的证据,胰岛素受体(Insulin receptor,INSR)成为近年来研究胰岛素抵抗的重要靶点。有关胰岛素抵抗发生的机理多认为与胰岛素受体数目和功能相关,但实际上研究报道结论不一。随着分子遗传学的发展,尤其是表观遗传学这一领域的研究深入,诸多学者试图通过寻找与PCOS典型病理特征的相关基因,观察相关基因是否存在表观遗传学的改变来解释有关高度异质性和家族聚集现象。DNA甲基化分析是常用的手段之一,从表观遗传学角度分析PCOS相关基因的DNA甲基化程度有望发现PCOS发病机制的可能原因,因而成为近年研究PCOS的热点。本研究主要通过收集PCOS患者的临床信息资料,描述其临床上的基本特征,并通过与正常人群的比较,研究和分析各种PCOS临床特征与AMHRII、INSR受体在卵巢、子宫内膜局部的定位、分布及表达,以及通过对两种受体基因DNA甲基化的关联性,探讨PCOS高度异质性和家族聚集现象与表观遗传学关系,为进一步阐明PCOS的发病机制提供新的思路。目的1.通过收集PCOS患者基本信息和临床资料,描述和分析其临床基本特征。2.采用免疫组织化学方法,分析和比较AMHR II、INSR在PCOS患者卵巢和子宫内膜的定位、分布及表达,描述AMHRII、INSR在卵巢、子宫内膜病理变化与临床特征的关联性。3.通过重亚硫酸盐处理测序法定量分析AMHR II、INSR基因DNA甲基化程度与临床特征的关系,探讨DNA甲基化与PCOS临床特征、异质性和家族聚集现象的关系,进一步阐明PCOS与表观遗传学的关系。方法1.PCOS患者临床资料收集和分析随机收集2014年03月—2014年12月在广东省计划生育专科医院门诊就诊及住院的95患者为研究对象,完成问卷填写相关信息、B超检查和其他临床资料。2.血液生殖相关激素测定采集患者月经周期第2-4天血液,采用ELISA法检测血清雌二醇(E2)、孕激素(P)、睾酮(T)、黄体生成素(LH)、卵泡刺激素(FSH)水平,计算卵泡刺激素/黄体生成素(FSH/LH)比值。空腹胰岛素(FINS)及空腹血糖(FPG)值,并计算HOMA-IR指数。3.病理组织形态学分析及鉴定取卵巢、子宫内膜组织后固定石蜡包埋,采用HE染色的方法进行病理组织形态学观察和分析。4.蛋白定位表达情况分析采用免疫组织化学(Immuno-Histochemistry,IHC)方法分别标记AMHRII和INSR,观察其在卵巢、子宫内膜中的定位、分布。5.受体基因甲基化的测定与分析采用重亚硫酸盐处理测序法定量检测两组血液AMHRII、INSR基因DNA甲基化程度,软件计算甲基化率。6.统计学分析采用SPSS21软件进行分析统计,分析AMHR II、INSR基因DNA甲基化程度与临床特征的关系,以及阐明PCOS与表观遗传学作用机制。结果1.PCOS患者临床资料基本特征收集的95例PCOS患者中,临床特征表现多样化,符合PCOS临床诊断标准;75例PCOS患者临床特征中,表现月经正常组18例,占24%;表现多囊卵巢改变54例,占72%;表现高雄激素或高雄激素体征共53例,占70.7%;表现胰岛素抵抗48例,占64%。表现月经正常组与稀发组两组之间的比较,月经稀发组年龄低,两者比较有显著性差异(P0.05)。表现IR组与无IR两组之间,IR组表现月经稀发现象,两者比较有显著性差异((P0.05)。2.病理组织形态学HE分析PCOS患者卵巢可见多个扩张的囊泡,颗粒细胞层数减少,间质增生,成熟黄体少见;正常组见不同发育阶段的卵泡,颗粒细胞层较厚,可见成熟黄体。PCOS患者组子宫内膜增厚,腺上皮细胞增生,腺体扭曲,间质明显增生;正常组子宫内膜未见明显增生。3.免疫组织化学分析AMHRII、INSRAMHRII、INSR在PCOS患者组及对照组的卵巢、子宫内膜均有表达。AMHRII、的表达主要定位于细胞膜,INSR表达主要定位在细胞浆,PCOS患者组INSR在卵巢颗粒细胞、卵巢间质细胞均有表达。AMHRII在颗粒细胞中表达更明显,卵巢间质中见少量分布。对照组AMHRII、INSR主要在未成熟卵泡颗粒细胞表达,间质中见少量分布。PCOS患者组见INSR强阳性表达,整体高于对照组。AMHRII在卵巢中的表达稍高于对照组,INSR在PCOS及对照组卵巢中表达无明显差异,AMHRII在PCOS及对照组子宫内膜表达无明显差异。4.重亚硫酸盐处理测序法定量分析DNA甲基化4.1 AMHR2基因DNA甲基化60例样本AMHR2基因DNA甲基化的共检测四个位点,其中PCOS组40例,正常组20例,其中P1、P2两组间无显著差异;其中P3、P4两组间有显著差异。在40例PCOS组内包括①月经稀发②高雄激素血症或高雄激素体征③一侧或双侧卵巢多囊样变三项临床表现,满足其中两项或三项症状齐全,共分四组,它们组间无相关性(P0.05);PCOS组内不同临床特征进行AMHRII基因甲基化程度与胰岛素抵抗关系有显著差异(R=0.532,p=0.00)。4.2 INSR基因DNA甲基化60例样本INSR基因DNA甲基化的共检测四个位点,其中PCOS组40例,正常组20例,其中P1、P2两组间无显著差异;其中P3、P4两组间有显著差异。在40例PCOS组内包括①月经稀发②高雄激素血症或高雄激素体征③一侧或双侧卵巢多囊样变三项临床表现,满足其中两项或三项症状齐全,共分四组,它们组间不同临床特征组间无相关性(P0.05);PCOS组内不同临床特征进行INSR基因甲基化程度与胰岛素抵抗关系有显著差异(R=0.281,p=0.03)。结论1.AMHRII、INSR基因DNA甲基化与PCOS临床基本特征有相关性,与PCOS不同临床特征组间无相关性;AMHRII、INSR基因DNA甲基化与胰岛素抵抗有关联性。2.INSR受体在PCOS患者子宫内膜中表达强阳性,而AMHRII受体表达稍高,表明AMHRII也参与子宫内膜病变,INSR高表达可能与子宫内膜增生有相关性。3.PCOS患者卵巢中INSR在卵泡及间质表达无明显改变,但在间质血管上皮表达明显,推测可能与卵巢间质增生有相关性。4.PCOS患者临床特征多样化,符合PCOS临床诊断标准,表现异质性;月经稀发与年龄低呈相关性,年龄低者月经稀发率高;有IR者多伴有表现月经稀发现象。
【关键词】：抗苗勒管II型受体 胰岛素受体 DNA甲基化 多囊卵巢综合征 重亚硫酸盐处理测序法
【学位授予单位】：暨南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R711.75
【目录】：

• 中文摘要3-7
• Abstract7-13
• 英汉缩略名词对照表13-16
• 第一章 前言16-24
• 1．PCOS的临床特征16-17
• 2．PCOS的病因及发病机理17-18
• 3．PCOS的表观遗传学18-20
• 4．AMHR基因与PCOS20-21
• 5．INSR基因与PCOS21-22
• 6．DNA甲基化与PCOS22-23
• 7．本研究的思路23-24
• 第二章 材料和方法24-33
• 1．研究对象24-26
• 2．实验材料和仪器设备26-27
• 3．实验方法27-33
• 4．数据分析33
• 第三章 结果33-41
• 1．PCOS 患者临床资料基本特征33-35
• 2．AMHRII、INSR在卵巢与子宫内膜中表达35-36
• 3．AMHRII、INSR甲基化BSP检测结果36-38
• 4． AMHRII、INSR甲基化与PCOS相关性38-41
• 第四章 讨论41-47
• 1．PCOS临床特征多样化和分析41-42
• 2．AMHRII、INSR基因在卵巢与子宫内膜中表达42-44
• 3．AMHRII、INSR基因及其甲基化在PCOS分析44-47
• 第五章 全文小结47
• 第六章 研究展望47-48
• 第七章 参考文献48-57
• 第八章 附录57-60
• 硕士期间发表的论文60-61
• 致谢61

【参考文献】

中国硕士学位论文全文数据库 前1条

1 汪慧;多囊卵巢综合征与抗苗勒管激素及其Ⅱ型受体的相关研究[D];安徽医科大学;2011年

  本文关键词：AMHRⅡ、INSR基因DNA甲基化与PCOS表观遗传学研究，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：338008