ETS2参与EGF/miR-124a信号轴调控胰腺β细胞功能的机制研究

发布时间：2021-09-11 14:24

　　胰腺β细胞是机体合成和分泌胰岛素的重要场所,其功能紊乱是导致糖尿病的重要因素。之前的研究表明胰腺β细胞中,表皮生长因子（EGF）和microRNA-124a（miR-124a）在胰岛素生物合成和分泌中起相反的作用,但是其相互调控机制仍然知之甚少。在本研究中,首先向MIN6和INS1细胞中添加EGF、EGFR抑制剂以及ERK和AKT抑制剂处理,qPCR检测miR-124a的表达量,证明了 EGF可以通过下游信号通路促分裂原激活的蛋白激酶激酶（MEK）和磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）级联抑制β细胞系中miR-124a的表达。其次,Western Blotting检测ETS2及其磷酸化蛋白水平变化,发现EGF处理可以增加ETS2的磷酸化水平,且ETS2与miR-124a的表达量一直呈现负相关,由此确定ETS（E26转化特异性）家族的成员转录因子ETS2参与这一调控,且这需要ETS2苏氨酸72位的磷酸化。然后,经过结合位点预测以及双荧光素酶载体报告体系鉴定,我们确认ETS2可以结合位于不同染色体上的三个miR-124a启动子中的保守结合位点AGGAANA/TN,从而在转录水平上降低了 miR-... 

【文章来源】：东北林业大学黑龙江省 211工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：67 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图２－１?ＥＧＦ抑制ｍｉＲ－ｌ２４ａ的表达??Ｆｉｇｕｒｅ?２－１?ＥＧＦ?ｉｎｈｉｂｉｔｓ?ｔｈｅ?ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｏｆ?ｍｉＲ－１２４ａ??Ａ：?ＥＧＦ理；Ｂ：?ＭＩ?

图２－２?ＥＧＦ通过ＥＲＫ及ＰＩ３Ｋ抑制ｍｉＲ－１２４ａ的表达??Ｆｉｇｕｒｅ?２－２?ＥＧＦ?ｉｎｈｉｂｉｔｓ?ｍｉＲ－１２４ａ?ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｔｈｒｏｕｇｈ?ＥＲＫ?ａｎｄ?ＰＩ３Ｋ??

?东北林业大学硕士学位论文???３．４．２?ＥＴＳ２调控ｍｉＲ－１２４ａ表达依赖于其鱗酸化的活化??将ＥＴＳ２的关键磷酸位点７２位苏氨酸（Ｔ７２）的磷酸化突变为丙氨酸（以Ｔ７２Ａ表??示），构建ＥＴＳ２磷酸化不敏感型突变体。当ＥＴＳ２的突变型过表达时，即使ＥＴＳ２蛋白??水平上升，也未观察到Ｔ７２位点的磷酸化，此时ｍｉＲ－１２４ａ表达也未显现出明显变化??（图３－２Ａ）。接下来还检查了预先通过ｓｉＲＮＡ降低五：ＴＳ２表达后，再用ＥＧＦ处理，对??ｍｉＲ－１２４ａ表达的影响。先在ＭＩＮ６细胞中先用ｓｉＥＴＳ２或ｓｉＮＣ转染３６?ｈ，然后按照前述??ＥＧＦ处理方式，将转染后的细胞血清饥饿１２?ｈ，再加入ＥＧＦ进行处理。以此检测该条??件下的ｍｉＲ－１２４ａ的表达，并通过Ｗｅｓｔｅｒｎ?Ｂｌｏｔｔｉｎｇ检测ＥＴＳ２憐酸化和总ＥＴＳ２的表??达。对照组转染ｓｉＮＣ与前述结果一致，ＥＧＦ能够促进ＥＴＳ２磷酸化。在ｓｉＥＴＳ２干涉条??件下，ＥＴＳ２的磷酸化作用减弱，同时发现用ｓｉＥＴＳ２的预处理可以缓解ＥＧＦ对ｍｉＲ－??１２４ａ表达的抑制作用（图３－２?Ｂ），表明ＥＴＳ２对于这种抑制作用至关重要。此外，先转??染含有野生型（ＷＴ）?ＥＴＳ２编码序列的载体或对照载体４８ｈ，然后用ＤＭＳＯ、Ｕ０１２６、??ＬＹ２９４００２和Ｇｅｆｉｔｉｎｉｂ分别处理，发现在减弱过表达引起的ＥＴＳ２磷酸化水平升高的同??时，ＭＥＫ，ＰＩ３Ｋ和ＥＧＦＲ抑制剂都可逆转ＥＴＳ２过表达诱导的ｍｉＲ－１２４ａ表达下降（图??Ｃ）。并且普遍观察到了?ＥＴＳ２磷酸化和ｍｉＲ－１２４ａ表达之间的负相关性（图３－２Ｂ，２??Ｃ）。这些结果表明，ＥＴＳ２参与了?ｍｉ

【参考文献】：
期刊论文
[1]miR-124a通过抑制TGF-β通路促进人胎盘间充质干细胞向胰腺祖细胞分化[J]. 陈冬梅,马海滨,刘淑丹,王立斌,李玉奎,魏军.  基础医学与临床. 2014(10)
[2]microRNA与胰腺发育以及干细胞分化的研究进展[J]. 赵荷珺,魏蕊,洪天配.  世界华人消化杂志. 2012(21)



本文编号：3393163