BefA蛋白对糖尿病小鼠模型的治疗作用及机制研究
发布时间：2021-09-22 22:06
背景和研究目的:糖尿病（Diabetes mellitus,DM）是一类以血糖持续升高为特征的代谢性疾病,临床上依据其对胰岛素依赖与否可分为Ⅰ型糖尿病（Type 1 diabetes mellitus,T1DM）和Ⅱ型糖尿病（Type 2 diabetes mellitus,T2DM）。糖尿病晚期可出现多器官损伤如糖尿病足、眼疾、肾病及心肌病等。糖尿病的治疗根据其类型不同、是否伴有并发症等而不同。一般地,Ⅰ型糖尿病需要长期给予胰岛素医治,Ⅱ型糖尿病的防治是在调节饮食结构的基础上,通过对促进胰岛素分泌或增强胰岛素敏感性或延迟食物吸收等药物进行单用或联合应用,严重者也可给予胰岛素治疗。因此,研发可以有效防治糖尿病的新型药物具有重大意义。BefA（Beta cell expansion factor A）是一种由人体肠道细菌产生的蛋白,研究显示该蛋白具有促进胰岛β细胞增殖的作用,提示其可能具有潜在的治疗糖尿病的价值。在本研究中,我们首先构建了原核BefA表达载体,利用大肠杆菌BL21系统进行蛋白表达与提纯,进而获得较高纯度的BefA重组蛋白,并通过灌胃给药方式观察了该重组蛋白对小鼠Ⅰ型和Ⅱ型...
【文章来源】：南昌大学江西省 211工程院校
【文章页数】：60 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图３．１重组菌株ＢＬ２１－ｐＥＴ２８Ｃ－ＢｅｆＡ正确性验证
?第３章结果与分析???８５－９０％之间。此外，ＢｅｆＡ蛋白在裂解液上清（条带３）中的表达量相对与裂解??液沉淀（条带４）比例更高，说明ＢｅｆＡ蛋白为上清表达，这一特性降低了蛋白??发酵和纯化的难度，提高了?ＢｅｆＡ蛋白在后续研究及开发中的潜力。??Ｍ?１?２?３?４?５??Ｊ｜??一—ｒ￣ｒｗ??一－＂ＷＳＳ?ｒ??２５ｋＤ［?－二Ｈ??—＇丨?＿＿?１．１１１．１１?ｍｉ?ｊｔｍｔｍ．??图３．２纯化获得ＢｅｆＡ蛋白的纯度检测。Ｍ：蛋白Ｍａｒｋｅｒ；?１：诱导前菌体：２：诱导后菌体；??３：裂解液上清；４：裂解液沉淀；５：上清纯化后蛋白。??３．３验证纯化获得ＢｅｆＡ蛋白的条带位置??为进一步验证目的蛋白位置，我们以Ｈｉｓ为一抗做了?Ｗｅｓｔｅｍ－ｂｌｏｔ实验，结??果显示２５?ｋＤ处有ＢｅｆＡ目的条带，说明我们纯化的蛋白完全正确（图３．３）。??Ｍ?１?２?３?４?５??图３．３验证纯化获得ＢｅｆＡ蛋白的条带位置。Ｍ：蛋白Ｍａｒｋｅｒ；?１：诱导前菌体？，２：诱导后??菌体；３：裂解液上清；４：裂解液沉淀；５：上清纯化后蛋白。??１８??
?第３章结果与分析???８５－９０％之间。此外，ＢｅｆＡ蛋白在裂解液上清（条带３）中的表达量相对与裂解??液沉淀（条带４）比例更高，说明ＢｅｆＡ蛋白为上清表达，这一特性降低了蛋白??发酵和纯化的难度，提高了?ＢｅｆＡ蛋白在后续研究及开发中的潜力。??Ｍ?１?２?３?４?５??Ｊ｜??一—ｒ￣ｒｗ??一－＂ＷＳＳ?ｒ??２５ｋＤ［?－二Ｈ??—＇丨?＿＿?１．１１１．１１?ｍｉ?ｊｔｍｔｍ．??图３．２纯化获得ＢｅｆＡ蛋白的纯度检测。Ｍ：蛋白Ｍａｒｋｅｒ；?１：诱导前菌体：２：诱导后菌体；??３：裂解液上清；４：裂解液沉淀；５：上清纯化后蛋白。??３．３验证纯化获得ＢｅｆＡ蛋白的条带位置??为进一步验证目的蛋白位置，我们以Ｈｉｓ为一抗做了?Ｗｅｓｔｅｍ－ｂｌｏｔ实验，结??果显示２５?ｋＤ处有ＢｅｆＡ目的条带，说明我们纯化的蛋白完全正确（图３．３）。??Ｍ?１?２?３?４?５??图３．３验证纯化获得ＢｅｆＡ蛋白的条带位置。Ｍ：蛋白Ｍａｒｋｅｒ；?１：诱导前菌体？，２：诱导后??菌体；３：裂解液上清；４：裂解液沉淀；５：上清纯化后蛋白。??１８??
【参考文献】：
期刊论文
[1]中国2型糖尿病防治指南（2017年版）[J]. Chinese Diabetes Society;. 中国实用内科杂志. 2018(04)
[2]2型糖尿病小鼠模型的建立与评价[J]. 许芳芳,王楠,李刚强,郭文芳,杨彩峰,刘德虎. 中国医学科学院学报. 2017(03)
[3]格列奈类促泌剂的临床认识[J]. 李娟,童南伟. 中国实用内科杂志. 2014(10)
[4]一株重组大肠杆菌/pET-28a-lpgad的构建及其高效生产γ-氨基丁酸转化条件的优化[J]. 田灵芝,徐美娟,饶志明. 生物工程学报. 2012(01)
[5]Molecular mechanisms of insulin resistance in type 2 diabetes mellitus[J]. Vandana Saini. World Journal of Diabetes. 2010(03)
本文编号：3404458
【文章来源】：南昌大学江西省 211工程院校
【文章页数】：60 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图３．１重组菌株ＢＬ２１－ｐＥＴ２８Ｃ－ＢｅｆＡ正确性验证
?第３章结果与分析???８５－９０％之间。此外，ＢｅｆＡ蛋白在裂解液上清（条带３）中的表达量相对与裂解??液沉淀（条带４）比例更高，说明ＢｅｆＡ蛋白为上清表达，这一特性降低了蛋白??发酵和纯化的难度，提高了?ＢｅｆＡ蛋白在后续研究及开发中的潜力。??Ｍ?１?２?３?４?５??Ｊ｜??一—ｒ￣ｒｗ??一－＂ＷＳＳ?ｒ??２５ｋＤ［?－二Ｈ??—＇丨?＿＿?１．１１１．１１?ｍｉ?ｊｔｍｔｍ．??图３．２纯化获得ＢｅｆＡ蛋白的纯度检测。Ｍ：蛋白Ｍａｒｋｅｒ；?１：诱导前菌体：２：诱导后菌体；??３：裂解液上清；４：裂解液沉淀；５：上清纯化后蛋白。??３．３验证纯化获得ＢｅｆＡ蛋白的条带位置??为进一步验证目的蛋白位置，我们以Ｈｉｓ为一抗做了?Ｗｅｓｔｅｍ－ｂｌｏｔ实验，结??果显示２５?ｋＤ处有ＢｅｆＡ目的条带，说明我们纯化的蛋白完全正确（图３．３）。??Ｍ?１?２?３?４?５??图３．３验证纯化获得ＢｅｆＡ蛋白的条带位置。Ｍ：蛋白Ｍａｒｋｅｒ；?１：诱导前菌体？，２：诱导后??菌体；３：裂解液上清；４：裂解液沉淀；５：上清纯化后蛋白。??１８??
?第３章结果与分析???８５－９０％之间。此外，ＢｅｆＡ蛋白在裂解液上清（条带３）中的表达量相对与裂解??液沉淀（条带４）比例更高，说明ＢｅｆＡ蛋白为上清表达，这一特性降低了蛋白??发酵和纯化的难度，提高了?ＢｅｆＡ蛋白在后续研究及开发中的潜力。??Ｍ?１?２?３?４?５??Ｊ｜??一—ｒ￣ｒｗ??一－＂ＷＳＳ?ｒ??２５ｋＤ［?－二Ｈ??—＇丨?＿＿?１．１１１．１１?ｍｉ?ｊｔｍｔｍ．??图３．２纯化获得ＢｅｆＡ蛋白的纯度检测。Ｍ：蛋白Ｍａｒｋｅｒ；?１：诱导前菌体：２：诱导后菌体；??３：裂解液上清；４：裂解液沉淀；５：上清纯化后蛋白。??３．３验证纯化获得ＢｅｆＡ蛋白的条带位置??为进一步验证目的蛋白位置，我们以Ｈｉｓ为一抗做了?Ｗｅｓｔｅｍ－ｂｌｏｔ实验，结??果显示２５?ｋＤ处有ＢｅｆＡ目的条带，说明我们纯化的蛋白完全正确（图３．３）。??Ｍ?１?２?３?４?５??图３．３验证纯化获得ＢｅｆＡ蛋白的条带位置。Ｍ：蛋白Ｍａｒｋｅｒ；?１：诱导前菌体？，２：诱导后??菌体；３：裂解液上清；４：裂解液沉淀；５：上清纯化后蛋白。??１８??
【参考文献】：
期刊论文
[1]中国2型糖尿病防治指南（2017年版）[J]. Chinese Diabetes Society;. 中国实用内科杂志. 2018(04)
[2]2型糖尿病小鼠模型的建立与评价[J]. 许芳芳,王楠,李刚强,郭文芳,杨彩峰,刘德虎. 中国医学科学院学报. 2017(03)
[3]格列奈类促泌剂的临床认识[J]. 李娟,童南伟. 中国实用内科杂志. 2014(10)
[4]一株重组大肠杆菌/pET-28a-lpgad的构建及其高效生产γ-氨基丁酸转化条件的优化[J]. 田灵芝,徐美娟,饶志明. 生物工程学报. 2012(01)
[5]Molecular mechanisms of insulin resistance in type 2 diabetes mellitus[J]. Vandana Saini. World Journal of Diabetes. 2010(03)
本文编号：3404458
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/nfm/3404458.html
最近更新
教材专著
