慢病毒介导的过表达或沉默MnSOD对Res处理的RA-FLSs增殖和凋亡的影响
发布时间：2021-10-07 05:58
背景:类风湿关节炎（rheumatoid arthritis,RA）是一种以成纤维样滑膜细胞（fibroblast-like synoviocytes,FLSs）异常增生为主要特征的自身免疫性疾病。它的主要临床特征是关节滑膜的慢性炎症,会导致关节进行性破坏,但是,它的发病机理尚不十分清楚。与正常关节相比较,RA患者的关节滑膜组织异常增生,膨大,临床表现类似于局部侵犯的肿瘤组织,会侵犯滑膜下软骨与骨,长期会导致关节畸形和功能障碍。所以,RA患者的FLSs的异常增殖和凋亡的失衡被认为是RA治疗的主要靶向指标之一。越来越多的研究显示,长期的炎症状态会导致RA患者处于氧化应激状态,活性氧（reactive oxygen species,ROS）在RA-FLSs异常增殖发挥重要作用。ROS是线粒体氧化呼吸链中产生的重要介质,而锰超氧化物歧化酶（manganese superoxide dismutase,MnSOD）是位于线粒体内的超氧化物歧化酶,是生物体内重要的氧自由基清除剂,被认为是调节ROS平衡的重要决定因素。SIRT3是线粒体中主要的去乙酰化酶,在调节ROS和抑制细胞氧化损伤方面发挥着重...
【文章来源】：安徽医科大学安徽省
【文章页数】：72 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
重组慢病毒载体构建A：MnSOD过表达Lv载体；B：MnSOD干扰Lv载体
图 4-2 四组稳定表达细胞系的建立A：在感染后 72h 后荧光显微镜下观察到 MOI 为 50 时 GFP 的感染效率；B：PURO 筛选后RA-FLSs 中 GFP 感染效率；C：Westernbloting 图像显示 MnSOD 在 MnSOD 过度表达组中的表达增加；D：在 MnSOD 干扰组中抑制 MnSOD 表达Fig 4-2 The 4 cell lines with stable gene expression, target gene expression.The infection rate of GFP in the RA-FLSs at an MOI of 50 was observed under a fluorescencemicroscope at 72 h following infection (A). The infection rate of GFP in RA-FLSs were screenedby puromycin (B). Representative images of Western bloting demonstrated increased MnSODexpression in the MnSOD overexpression group (C) and suppressed MnSOD expression in theMnSOD RNAi group (D).*P<0.05 vs. NC.
图 4-3 Res 通过 MnSOD 表达调节线粒体超氧化物的产生、B、C：用 MitoSOXRed 检测线粒体超氧化物水平，并用共聚焦激光扫描显微镜观察荧。D：统计分析定量显示了线粒体超氧化物水平，以相对于 NC 组的百分比变化表示。采单因素方差分析，然后两两之间进行 SNK-q 分析。*P<0.05、**P<0.01，MnSODRNAivsC；#P<0.05、##P<0.01、MnSOD 过度表达组与 NC 的对比。每个实验重复 5 次，n=5Fig 4-3 Res increases the level of mitochondrial reactive oxygen species through MnSODexpression.he mitochondrial superoxide levels were detected using MitoSOX Red, and the fluorescencmages were obtained using confocal laser scanning microscopy (ABC). The histogram shows thuantification of the mitochondrial superoxide levels, expressed as the percentage change relativo the NC group (D). One–way ANOVA followed by SNK-q test was used for comparisons amonppropriate datasets.*P < 0.05,**P<0.01, MnSOD RNAi vs. NC;#P < 0.05,##P <0.01, MnSOD
【参考文献】：
期刊论文
[1]线粒体活性氧与肿瘤的研究进展[J]. 谢丽霞,叶小群. 重庆医学. 2017(11)
[2]类风湿性关节炎患者外周血CD4+T细胞存在凋亡缺陷[J]. 曹永贺,刘健. 细胞与分子免疫学杂志. 2015(05)
本文编号：3421485
【文章来源】：安徽医科大学安徽省
【文章页数】：72 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
重组慢病毒载体构建A：MnSOD过表达Lv载体；B：MnSOD干扰Lv载体
图 4-2 四组稳定表达细胞系的建立A：在感染后 72h 后荧光显微镜下观察到 MOI 为 50 时 GFP 的感染效率；B：PURO 筛选后RA-FLSs 中 GFP 感染效率；C：Westernbloting 图像显示 MnSOD 在 MnSOD 过度表达组中的表达增加；D：在 MnSOD 干扰组中抑制 MnSOD 表达Fig 4-2 The 4 cell lines with stable gene expression, target gene expression.The infection rate of GFP in the RA-FLSs at an MOI of 50 was observed under a fluorescencemicroscope at 72 h following infection (A). The infection rate of GFP in RA-FLSs were screenedby puromycin (B). Representative images of Western bloting demonstrated increased MnSODexpression in the MnSOD overexpression group (C) and suppressed MnSOD expression in theMnSOD RNAi group (D).*P<0.05 vs. NC.
图 4-3 Res 通过 MnSOD 表达调节线粒体超氧化物的产生、B、C：用 MitoSOXRed 检测线粒体超氧化物水平，并用共聚焦激光扫描显微镜观察荧。D：统计分析定量显示了线粒体超氧化物水平，以相对于 NC 组的百分比变化表示。采单因素方差分析，然后两两之间进行 SNK-q 分析。*P<0.05、**P<0.01，MnSODRNAivsC；#P<0.05、##P<0.01、MnSOD 过度表达组与 NC 的对比。每个实验重复 5 次，n=5Fig 4-3 Res increases the level of mitochondrial reactive oxygen species through MnSODexpression.he mitochondrial superoxide levels were detected using MitoSOX Red, and the fluorescencmages were obtained using confocal laser scanning microscopy (ABC). The histogram shows thuantification of the mitochondrial superoxide levels, expressed as the percentage change relativo the NC group (D). One–way ANOVA followed by SNK-q test was used for comparisons amonppropriate datasets.*P < 0.05,**P<0.01, MnSOD RNAi vs. NC;#P < 0.05,##P <0.01, MnSOD
【参考文献】：
期刊论文
[1]线粒体活性氧与肿瘤的研究进展[J]. 谢丽霞,叶小群. 重庆医学. 2017(11)
[2]类风湿性关节炎患者外周血CD4+T细胞存在凋亡缺陷[J]. 曹永贺,刘健. 细胞与分子免疫学杂志. 2015(05)
本文编号：3421485
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