FKBP51在抵制高脂诱导肥胖中的作用

发布时间：2017-05-03 22:09

  本文关键词：FKBP51在抵制高脂诱导肥胖中的作用，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：[目的] 甾体激素在哺乳动物的生长、发育、分化、生殖等诸多方面都起着重要的调控作用,这些激素主要是通过与作为细胞内信号传导与转录因子的特定甾体激素受体蛋白结合,从而达到调控目的基因表达的作用。糖皮质激素受体(GR)属于甾体激素受体超家族的成员之一,在机体内广泛表达,并介导糖皮质激素实现对机体行为及代谢等功能的调控,近年来的研究表明,GR对机体新陈代谢调控具有重要意义。FKBP51是一种具有肽基脯氨酰顺-反异构酶(PPIase)活性的免疫亲和蛋白,它含有多肽重复序列结构域(TPR),能够介导蛋白与蛋白之间的相互作用。它作为一种共伴侣蛋白,能够直接与伴侣蛋白(热休克蛋白Hsp90/70等)结合并参与激素-受体复合物的形成和调控。FKBP51对多种甾体激素受体转录活性起到调控作用,可负向调控糖皮质激素受体。已有研究表明,FKBP51在脂肪生成中发挥重要的作用,且下丘脑中的FKBP51的高表达与肥胖有关。因此,我们通过对FKBP51基因敲除小鼠表型的分析,来探究FKBP51的缺失与肥胖的关系。[方法]通过对高脂诱导的FKBP51基因敲除小鼠表型的研究,来分析FKBP51基因的缺失对机体的影响。1)FKBP51基因敲除小鼠的表型分析及高脂喂养。将实验小鼠分为四组,分别为正常饮食野生型小鼠(N WT)、正常饮食FKBP51基因敲除小鼠(N KO)、高脂饮食野生型小鼠(HF WT)和高脂饮食FKBP51基因敲除小鼠(HF KO),分别测定四组小鼠4-10周龄的体重和摄食量；2)脂肪含量分析。为了验证HF KO和HF WT的脂肪含量,分别对两组小鼠进行核磁共振成像分析,并计算脂肪的相对面积；3)肝脏病理学分析。对四组小鼠肝脏切片,分别进行HE染色、油红O染色和电镜分析,来研究小鼠肝脏组织病理学的变化；4)能量代谢水平分析。运用MM-100代谢监测系统,对四组小鼠的代谢情况(02消耗量、C02产量、呼吸商和产热量)监测24小时,记录的数据进行分析；5)RNA表达谱测序。分别提取四组小鼠肝脏组织的RNA,利用第二代测序技术,对N WT、NKO、HF WT和HF KO的肝脏RNA进行测序分析,以探寻FKBP51 KO小鼠与WT小鼠在正常饮食和高脂饮食条件下基因表达的差异；6)利用Real-time PCR和免疫印迹实验,对RANseq中与肝脂脂类代谢和自噬相关基因在肝脏中的表达情况进行进一步的验证。7)脂肪诱导分化。对野生型和FKBP51基因敲除小鼠的永生化成纤维细胞(MEF)进行脂肪诱导分化,观察FKBP51缺失对体外脂肪分化的影响。[结果] 1)在高脂饲养条件下,FKBP51 KO和WT小鼠的摄食量基本相同,但基因敲除小鼠体重明显低于野生型小鼠;2)通过核磁影像分析发现FKBP51 KO基因敲除小鼠高脂饮食后体内脂肪明显少于野生型小鼠；3)肝脏病理学分析发现,FKBP51基因敲除小鼠高脂诱导后,肝脏中脂滴的积累明显少于野生型小鼠,同时未出现脂肪肝；4)通过电镜观察发现,在FKBP51KO小鼠肝脏中自噬小体增多,并通过Real-time PCR和免疫印迹得到验证；5)通过代谢笼分析发现,FKBP51基因敲除小鼠代谢水平增强；6)RNAseq结果揭示FKBP51的缺失会引起一些能量代谢、脂质代谢相关基因变化明显；利用Real-time PCR和免疫印迹验证FKBP51KO小鼠肝脏中能量代谢和脂质代谢相关酶ATPase、 LPL等表达上调；7)脂肪诱导分化后,FKBP51KOMEF细胞内脂滴明显少于野生型MEF细胞。[结论]1)FKBP51基因敲除小鼠对高脂诱导的肥胖有抵制作用；2)FKBP51基因敲除小鼠肝脏中脂滴聚集较少,自噬小体增多；3)FKBP51基因敲除小鼠呼吸能量代谢水平较旺盛,脂质代谢与能量代谢相关酶LPL、UCP-1、ATPase等表达增加；4)FKBP51基因敲除小鼠MEF细胞脂肪诱导分化受阻。
【关键词】：FKBP51 基因敲除小鼠 能量代谢 肝脏病理学 RNA-seq
【学位授予单位】：北京协和医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R589.2
【目录】：

• 摘要4-6
• Abstract6-8
• 前言8-15
• 实验材料15-22
• 实验方法22-37
• 实验结果37-59
• 讨论59-63
• 结论63-64
• 英文缩略表64-65
• 参考文献65-73
• 致谢73-74

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前1条

1 ;Molecular mechanism and regulation of autophagy[J];Acta Pharmacologica Sinica;2005年12期

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本文编号：343846