Nε-羧甲基赖氨酸调控的平滑肌细胞基质小泡通过Sortilin促进糖尿病斑块内钙化
发布时间：2021-10-16 15:43
目的探究CML调控基质小泡释放从而介导糖尿病斑块内钙化的具体机制。方法（1）第一部分选取2017年至2020年在江苏大学附属医院心内科住院的患者71例,根据纳入标准和排除标准将患者分为糖尿病组（A组）,糖尿病动脉粥样硬化组（B组）,糖尿病斑块内钙化组（C组）。采集三组患者的血清学样本,通过差速离心法分离血清中基质小泡（MVs）,进行酶联免疫吸附测定（ELISA）及统计学分析。（2）第二部分6周龄雄性ApoE-/-小鼠适应环境1周,予40mg/kg/day链脲佐菌素腹腔注射,连续5天。2周后血糖水平超过300mg/dL的ApoE-/-小鼠入组。将糖尿病ApoE-/-小鼠随机分为三组:对照组（普食,n=8）、高脂组（高脂饮食,n=8）、CML组（高脂饮食+尾静脉注射CML,n=8）,连续饲养32周后对小鼠进行安乐死,选取主动脉组织进行形态学染色（HE染色、油红O染色、免疫荧光染色、Von Kossa染色）及分子生物学检测。（3）第三部分将小鼠主动脉平滑肌细胞（ASMCs）分为三组:对照组、ox-LDL组、CML组。所有细胞经...
【文章来源】：江苏大学江苏省
【文章页数】：70 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
CD9和CML的浓度及相关性
Nε-羧甲基赖氨酸调控的平滑肌细胞基质小泡通过Sortilin促进糖尿病斑块内钙化16图1.2CML对ApoE-/-小鼠AS及斑块内钙化形成的影响。A：油红O染色显示AS斑块，斑块内钙化由VonKossa染色检测。B：ELISA检测CML在主动脉中的浓度。C：钙含量测定比较各组主动脉的钙含量。D：ImageJ软件测量主动脉斑块面积与主动脉面积的比率。*表示与对照组相比，P<0.05；#表示与高脂组相比，P<0.05。Figure1.2EffectofCMLonatheroscleroticplaqueformationandcalcificationinApoE-/-mice.A:OilredOstainingshowedatheroscleroticplaques,andcalcificationinaorticatheroscleroticplaqueswasdetectedbyVonKossastaining.B:ELISAwasusedtodetecttheconcentrationofCMLinaorta.C:Calciumcontentdeterminationcomparesthecalciumcontentoftheaortaineachgroup.D:ImageJsoftwaremeasurestheratioofaorticplaqueareatoaorticarea.*P<0.05comparedwithNCgroup;#P<0.05comparedwithHFDgroup.4.4CML调控平滑肌细胞分泌MVs用不同浓度的CML处理MOVAS细胞，经过4天的钙化诱导，分离并定量培养基中的MVs。结果显示，随着CML浓度的增加，平滑肌细胞释放的MVs数量也随之增加（图1.3）。但是与20μM浓度的CML相比，40μM浓度的CML刺激下，平滑肌细胞分泌的MVs数量反而减少，我们推测这可能与高浓度CML的细胞毒性有关。综上，这些结果提示CML能够调控平滑肌细胞分泌MVs，那么MVs是否在CML促进斑块内钙化的过程中发挥作用？
江苏大学硕士学位论文17图1.3CML对平滑肌细胞分泌MVs的影响。A：NTA检测ASMCs分泌MVs的浓度。B：NTA检测MVs的纯度和粒径。C：不同粒径物质的浓度分布。Figure1.3EffectofCMLonmatrixvesiclessecretedbysmoothmusclecells.A:ConcentrationofMVssecretedbyASMCswasdetectedbyNTA.B:ThepurityanddiameterofMVs.C:Concentrationdistributionofsubstanceswithdifferentdiameter.4.5CML刺激平滑肌细胞分泌的MVs促进钙化我们将20μMCML组中平滑肌细胞分泌的MVs分别以210∧9Particles/kg/day、410∧9Particles/kg/day、810∧9Particles/kg/day的浓度通过尾静脉注射进糖尿病ApoE-/-小鼠体内，连续注射5天。高脂饮食饲喂16周后，通过VonKossa染色和茜素红染色观察MVs对钙化的影响。结果表明，随着MVs浓度的增加，斑块内钙化的程度加重（图1.4A）。钙含量结果显示低浓度MVs组、中浓度MVs组、高浓度MVs组的动脉钙含量分别是CML组的1.51倍，2.45倍和3.9倍（图1.4C）。接着我们对MOVAS细胞进行了相同的处理，钙化诱导4天后进行茜素红染色，结果与动物实验一致（图1.4B）。这些结果表明，CML刺激下，平滑肌细胞分泌的MVs在动物和细胞水平上都促进钙化。
【参考文献】：
期刊论文
[1]关注糖尿病与血管钙化的共同发病机制和临床意义[J]. 孙学娇,刘乃丰. 中国动脉硬化杂志. 2020(02)
[2]单核细胞/高密度脂蛋白比值与2型糖尿病合并下肢动脉硬化闭塞症的相关性分析[J]. 李志超,孟钰,段会然,李恩. 中国动脉硬化杂志. 2020(03)
[3]防治血管钙化,依然任重道远[J]. 王中群,孙振. 中国动脉硬化杂志. 2018(12)
[4]关注血管钙化的起源、演进与转归研究[J]. 王中群,李丽华. 中国动脉硬化杂志. 2018(11)
[5]糖化白蛋白在动脉粥样硬化发生发展中的作用[J]. 康攀攀,姚树桐,周健,秦树存. 中国动脉硬化杂志. 2018(11)
[6]基质小泡在糖尿病足截肢患者胫前动脉斑块内钙化中的作用分析[J]. 景乐乐,王中群. 中南医学科学杂志. 2018(06)
[7]核因子κB通过Sortilin促进荷脂THP-1巨噬细胞泡沫化[J]. 高安博,彭田红,钟丽园,孙莎,陈熙,万炜,谢巍,李素云,吕运成. 中国动脉硬化杂志. 2018(07)
[8]Nε-羧甲基赖氨酸通过RAGE促进平滑肌细胞源性泡沫细胞形成[J]. 包正阳,孙振,李丽华,王小东,宋娟,邵晨,严金川,王中群. 中国动脉硬化杂志. 2018(07)
[9]糖尿病合并冠心病患者血清标志物miR-24的变化及临床意义[J]. 方丹,邓鑫,贺朝晖,吴剑波,罗茂. 中国动脉硬化杂志. 2018(05)
[10]分拣受体Sortilin促进巨噬细胞内脂质蓄积[J]. 钟丽园,彭田红,高安博,万炜,陈熙,王佐,唐志晗,王莉,欧阳宇甲,吕运成. 中国动脉硬化杂志. 2018(02)
博士论文
[1]多排螺旋CT对动脉粥样硬化斑块无创探查及其冠状动脉成像研究[D]. 吴文辉.中国协和医科大学 2006
本文编号：3440076
【文章来源】：江苏大学江苏省
【文章页数】：70 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
CD9和CML的浓度及相关性
Nε-羧甲基赖氨酸调控的平滑肌细胞基质小泡通过Sortilin促进糖尿病斑块内钙化16图1.2CML对ApoE-/-小鼠AS及斑块内钙化形成的影响。A：油红O染色显示AS斑块，斑块内钙化由VonKossa染色检测。B：ELISA检测CML在主动脉中的浓度。C：钙含量测定比较各组主动脉的钙含量。D：ImageJ软件测量主动脉斑块面积与主动脉面积的比率。*表示与对照组相比，P<0.05；#表示与高脂组相比，P<0.05。Figure1.2EffectofCMLonatheroscleroticplaqueformationandcalcificationinApoE-/-mice.A:OilredOstainingshowedatheroscleroticplaques,andcalcificationinaorticatheroscleroticplaqueswasdetectedbyVonKossastaining.B:ELISAwasusedtodetecttheconcentrationofCMLinaorta.C:Calciumcontentdeterminationcomparesthecalciumcontentoftheaortaineachgroup.D:ImageJsoftwaremeasurestheratioofaorticplaqueareatoaorticarea.*P<0.05comparedwithNCgroup;#P<0.05comparedwithHFDgroup.4.4CML调控平滑肌细胞分泌MVs用不同浓度的CML处理MOVAS细胞，经过4天的钙化诱导，分离并定量培养基中的MVs。结果显示，随着CML浓度的增加，平滑肌细胞释放的MVs数量也随之增加（图1.3）。但是与20μM浓度的CML相比，40μM浓度的CML刺激下，平滑肌细胞分泌的MVs数量反而减少，我们推测这可能与高浓度CML的细胞毒性有关。综上，这些结果提示CML能够调控平滑肌细胞分泌MVs，那么MVs是否在CML促进斑块内钙化的过程中发挥作用？
江苏大学硕士学位论文17图1.3CML对平滑肌细胞分泌MVs的影响。A：NTA检测ASMCs分泌MVs的浓度。B：NTA检测MVs的纯度和粒径。C：不同粒径物质的浓度分布。Figure1.3EffectofCMLonmatrixvesiclessecretedbysmoothmusclecells.A:ConcentrationofMVssecretedbyASMCswasdetectedbyNTA.B:ThepurityanddiameterofMVs.C:Concentrationdistributionofsubstanceswithdifferentdiameter.4.5CML刺激平滑肌细胞分泌的MVs促进钙化我们将20μMCML组中平滑肌细胞分泌的MVs分别以210∧9Particles/kg/day、410∧9Particles/kg/day、810∧9Particles/kg/day的浓度通过尾静脉注射进糖尿病ApoE-/-小鼠体内，连续注射5天。高脂饮食饲喂16周后，通过VonKossa染色和茜素红染色观察MVs对钙化的影响。结果表明，随着MVs浓度的增加，斑块内钙化的程度加重（图1.4A）。钙含量结果显示低浓度MVs组、中浓度MVs组、高浓度MVs组的动脉钙含量分别是CML组的1.51倍，2.45倍和3.9倍（图1.4C）。接着我们对MOVAS细胞进行了相同的处理，钙化诱导4天后进行茜素红染色，结果与动物实验一致（图1.4B）。这些结果表明，CML刺激下，平滑肌细胞分泌的MVs在动物和细胞水平上都促进钙化。
【参考文献】：
期刊论文
[1]关注糖尿病与血管钙化的共同发病机制和临床意义[J]. 孙学娇,刘乃丰. 中国动脉硬化杂志. 2020(02)
[2]单核细胞/高密度脂蛋白比值与2型糖尿病合并下肢动脉硬化闭塞症的相关性分析[J]. 李志超,孟钰,段会然,李恩. 中国动脉硬化杂志. 2020(03)
[3]防治血管钙化,依然任重道远[J]. 王中群,孙振. 中国动脉硬化杂志. 2018(12)
[4]关注血管钙化的起源、演进与转归研究[J]. 王中群,李丽华. 中国动脉硬化杂志. 2018(11)
[5]糖化白蛋白在动脉粥样硬化发生发展中的作用[J]. 康攀攀,姚树桐,周健,秦树存. 中国动脉硬化杂志. 2018(11)
[6]基质小泡在糖尿病足截肢患者胫前动脉斑块内钙化中的作用分析[J]. 景乐乐,王中群. 中南医学科学杂志. 2018(06)
[7]核因子κB通过Sortilin促进荷脂THP-1巨噬细胞泡沫化[J]. 高安博,彭田红,钟丽园,孙莎,陈熙,万炜,谢巍,李素云,吕运成. 中国动脉硬化杂志. 2018(07)
[8]Nε-羧甲基赖氨酸通过RAGE促进平滑肌细胞源性泡沫细胞形成[J]. 包正阳,孙振,李丽华,王小东,宋娟,邵晨,严金川,王中群. 中国动脉硬化杂志. 2018(07)
[9]糖尿病合并冠心病患者血清标志物miR-24的变化及临床意义[J]. 方丹,邓鑫,贺朝晖,吴剑波,罗茂. 中国动脉硬化杂志. 2018(05)
[10]分拣受体Sortilin促进巨噬细胞内脂质蓄积[J]. 钟丽园,彭田红,高安博,万炜,陈熙,王佐,唐志晗,王莉,欧阳宇甲,吕运成. 中国动脉硬化杂志. 2018(02)
博士论文
[1]多排螺旋CT对动脉粥样硬化斑块无创探查及其冠状动脉成像研究[D]. 吴文辉.中国协和医科大学 2006
本文编号：3440076
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