锶通过激活AMPK/mTOR信号通路介导自噬促进成骨分化

发布时间：2021-10-16 23:12

　　目的:锶是一种与钙同族且化学性质相似的碱土金属,它具有良好的亲骨活性,可以促进成骨细胞介导的骨形成,同时抑制破骨细胞介导的骨吸收,促进骨骼基质矿化,增加骨密度。锶类药物以及衍生生物材料在骨损伤与修复相关领域受到高度的关注。虽然目前已有多篇文献报道了锶的促成骨作用,但其相关分子机制报道相对较少,尚需进一步探讨其具体分子机制,为其在临床和生物材料中的应用提供支持证据。细胞自噬,又称巨自噬或宏自噬,是一种发生于真核细胞内的高度保守的自我降解现象,具有维持内环境稳态的作用。自噬在细胞的生长,分化,成熟与内稳态维持等多个方面均具有非常重要的作用。近期,有文章报道细胞自噬参与调控人体干细胞的成骨分化过程,但目前尚不清楚细胞自噬是否在锶诱导细胞成骨分化的过程中也发挥了相关的调控作用。本研究主要通过检测经锶处理的小鼠前成骨细胞MC3T3-E1亚克隆14型的成骨分化情况与细胞自噬水平变化,探讨锶发挥促进成骨分化作用的相关分子机制。方法:1.锶的细胞毒性:应用不同浓度（0、3、6、12、24、48、96 mM）的锶离子溶液处理细胞并培养3天,通过MTT方法检测细胞增殖情况;2.锶促成骨分化作用:应用实时荧... 

【文章来源】：天津医科大学天津市 211工程院校

【文章页数】：80 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

不同浓度锶对MC3T3-E1细胞生长增殖的影响结果

28图 2 锶诱导 MC3T3-E1 细胞成骨分化注：图 A，B 表示 MC3T3 细胞经不同浓度的锶刺激 3 天后 RunX-2 与 OCN 的相对核酸表达量，**表示 p<0.01，***表示 p<0.005 ，****表示 p<0.001,图 C 为细

30图 3 锶诱导成骨分化的过程中细胞自噬水平的检测注：图 A，B，C 为从蛋白水平检测细胞经锶（3mM）处理后细胞内 SQSTM1/p62以及 LC-3 I 型/II 型蛋白的表达情况，tubulin 作为内参，*代表 p<0.05 ，**代表p<0.01，图 D 为两组细胞经单丹黄酰尸胺染色后于荧光显微镜下直接观察带有绿色荧光的自噬小体；4.抑制细胞内自噬过程影响锶促进细胞成骨分化作用为了进一步明确细胞自噬在锶促进成骨分化过程中的作用，我们选用自噬抑制剂 3-甲基腺嘌呤（3-MA）预先处理 MC3T3-E1 细胞，抑制细胞基础自噬水平。从图四结果可以看出，细胞经 3-MA 处理后，STSQM1/p62 蛋白表达增加，在细胞内出现蓄积，而 LC-3 II 型蛋白表达下降，LC-3 I 型蛋白表达增加，LC-3I/II 比值未出现倒置，提示细胞自噬处于受抑制的状态。同时细胞经 MDC 荧光染色后视野内几乎看不到带有绿色荧光的酸性小体，呈现出与蛋白电泳结果相类似的趋势，3-甲基腺嘌呤的预处理可抑制细胞自噬活动。而此时继续使用 3mM


本文编号：3440671