TRIF-NF-κB炎症信号通路在TLR3介导胰岛β细胞损伤中的作用

发布时间：2021-10-19 11:01

　　目的糖尿病及其并发症作为一类常见的慢性疾病,给患者个人以及社会带来了巨大的负担。糖尿病发病机制众多,其中胰岛素抵抗、胰岛β细胞的损伤及功能障碍被认为在糖尿病发病过程中起重要作用,而全身慢性炎症则被认为是导致胰岛抵抗和胰岛素分泌绝对/相对不足一个重要因素。作为天然免疫系统的重要受体,Toll样受体家族（Toll like receptors,TLRs）在诱导机体炎症因子的释放、促进相关疾病的发生中起着重要的作用。另外,作为在胰腺中表达较高的受体,TLR3相关信号通路在调节免疫炎症和葡萄糖稳态过程中起重要调节作用,但具体作用机制尚不明确。本研究选用小鼠胰岛β细胞株（NIT-1）为研究对象,用TLR3的特异性激动剂聚肌胞Poly（I:C）（PIC）刺激小鼠的胰岛β细胞。旨在探讨激活TLR3信号通路对胰岛β细胞增殖和凋亡的影响与可能的作用机制。方法采用NIT-1细胞株为研究对象,用DMEM培养基培养细胞,定期更换细胞培养液。根据细胞生长情况进行传代培养,当细胞处于增殖期比例达到80%-90%时进行实验分组。分为空白对照组及实验组,分别接种在96孔板上进行培养。24小时候后观察各组细胞贴壁和生长... 

【文章来源】：西南医科大学四川省

【文章页数】：68 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

不同浓度PIC干预后，CCND1蛋白表达情况

263.2凋亡相关分子蛋白Caspase-3在予以不同浓度PIC处理后，凋亡相关蛋白分子caspase3的表达出现了明显改变。caspase3可以分为无活性的前体pro-CASP3以及有活性的cleaved-CASP3。通过与GAPDH这一内参相比较，pro-CASP3在低浓度和中浓度PIC刺激时表达量较空白对照组有差异（P<0.05），但是其上调程度明显低于高浓度刺激（P<0.0001）；各干预组经PIC刺激后，cleaved-CASP3蛋白表达量较空白对照组也明显上调，且升高幅度呈浓度依赖性（P<0.0001），蛋白印迹条带与统计结果见图4。图4：不同浓度PIC干预后，caspase3蛋白表达情况注：(BLANK:正常组，PIC-30:30μg/mlPIC组，PIC-60:60μg/mlPIC组，PIC-90:90μg/mlPIC组，GAPDH:glyceraldehyde-3-phosphatedehydrogenase,PIC:polyinosinic:polycytidylicacid.*:P<0.05,***:P<0.0001)

273.3TRIF如图5所示，相比于空白对照组，NIT-1细胞在经不同浓度PIC干预后，TRIF蛋白表达均呈现明显上调（P<0.0001）。在60μg/ml和90μg/ml浓度下刺激时，TRIF蛋白上调程度较低浓度（30μg/ml）时有明显差异（P<0.0001），且呈现出浓度依赖的趋势。願硜硜願塚顛图5：不同浓度PIC干预后，TRIF蛋白表达情况注：(BLANK:正常组，PIC-30:30μg/mlPIC组，PIC-60:60μg/mlPIC组，PIC-90:90μg/mlPIC组，GAPDH:glyceraldehyde-3-phosphatedehydrogenase,PIC:polyinosinic:polycytidylicacid,TRIF:Toll/IL-1receptordomaincontainingadaptorproteininducingIFN-β.***:P<0.0001)3.4NF-κB如图6所示，相比于空白对照组，在经不同浓度PIC干预后，NIT-1细胞NF-κB蛋白表达均出现明显上调，且呈现浓度依赖性上调（P<0.0001）。高浓度PIC（90μg/ml）刺激下，NF-κB表达明显高于对照组，且高于低浓度与中浓度刺激组（P<0.0001）。

【参考文献】：
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本文编号：3444745