过氧化氢对成骨细胞自噬流的影响及白藜芦醇的干预作用

发布时间：2021-10-24 20:49

　　目的:观察过氧化氢（H₂O₂）对小鼠成骨前体细胞系MC3T3-E1细胞氧化损伤过程中自噬流的变化,及白藜芦醇（Res）对H₂O₂致成骨细胞氧化损伤的干预作用,探讨Res对氧化损伤成骨细胞的抗氧化保护作用及自噬在其中的作用。方法:1.将小鼠成骨前体细胞系MC3T3-E1细胞置于饱和湿度、5%CO2、37℃恒温的孵育箱内培养;2.取生长状态良好的P3-P4代成骨细胞,通过检测不同浓度H₂O₂（0.1²00μM）对成骨细胞活力的影响筛选H₂O₂适宜损伤浓度及H₂O₂对成骨细胞自噬标志蛋白时间变化的影响筛选H₂O₂适宜损伤时间,构建成骨细胞氧化损伤模型。检测不同浓度Res（0.1-50μM）对H₂O₂致成骨细胞活力下降的干预作用,初步筛选Res干预浓度,检测不同浓度Re... 

【文章来源】：兰州大学甘肃省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：63 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

实验简要流程图

研究生学位论文 过氧化氢对成骨细胞自噬流的影响及白前冷却的 PBS（4°C）洗涤细胞 1 次，以 1000rpm 的转速上清；工作浓度的 Binding Buffer（1×）300μL 重新把细胞悬 AnnexinV-FITC（5μL）混匀，置于暗室内或铝箔包裹in；入 5μL 的 PI 在上机前 3-5min。补加工作浓度的 Binding Buffer（1×）200μL 在上机前（见北京索莱宝流式检测试剂盒说明书）。氧化应激水平测定胞活性氧（ROS）检测图 2：

3 细胞氧化应激水平测定3.1 细胞活性氧（ROS）检测如下图 2： DCF（二氯荧光黄）其荧光强度与 ROS 生成呈正相关性图 2 细胞活性氧（ROS）检测原理示意图步骤：具体操作方法按照北京索莱宝活性氧检测试剂盒说明书。3.2 氧化应激指标 MDA、SOD、TAC 检测）丙二醛（MDA）测定如下图 3：

【参考文献】：
期刊论文
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本文编号：3455953