遗传性凝血因子Ⅴ/Ⅷ联合缺乏症及凝血因子Ⅺ缺乏症的分子机制研究

发布时间：2021-11-13 22:03

　　第一部分遗传性凝血因子Ⅴ/Ⅷ联合缺乏症的分子机制研究目的:凝血因子V/Ⅷ联合缺乏症（F5F8D）是一种罕见的出血性疾病,大多数患者有自发出血症状。本研究旨在对一例中国F5F8D家系进行基因检测,探讨其分子发病机制。方法:先证者为一名30岁女性,自述有月经过多和皮肤易青紫的症状,父母近亲结婚并无异常出血倾向。对患者及其父、母进行血常规、凝血四项、混合血浆纠正的APTT试验、内外源凝血因子活性及血浆vWF:Ag检测。根据检查结果,应用聚合酶链反应（PCR）扩增先证者FV基因（F5）或FⅧ基因（F8）、LMAN1及MCFD2基因的所有外显子和侧翼序列,并对扩增产物进行直接测序。测序结果应用Chromas软件与正常序列进行比对,根据先证者基因突变位点扩增其父、母相关基因位点并测序。应用Clustal-X2.1软件分析突变位点的保守性,Polyphen2、SIFT、Mutation Teasers、PyMOL软件分析突变结果对蛋白质结构功能的影响。结果:先证者的FV:C、FⅧ:C、PT、APTT和vWF:Ag分别为9.9%、5.9%、17s、75s和101.0%,混合血浆纠正试验示PT、APTT... 

【文章来源】：南京大学江苏省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：51 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图１．?ＭＣＦＤ２基因４号外显子基因序列，Ａ为先证者，Ｂ为其父亲，Ｃ为其母亲，??黑色箭头所指部位为突变位点，先证者发生ＭＣＦＤ２基因纯合错义突变ｇ．?３９８Ａ＞Ｔ??

其父亲在该位点的基因型正常，??如图２．先证者家族遗传图谱见图３．。??Ｓ．３９ＳＡ＞Ｔ??？?＊?ｉ?＊?？?？?■?？?？？？？＊？?？?？?？＿？？？？？??Ａ??Ｂ??ＩＭＴｕｄｄＡｌＭｈｉｌＭｌＭｆ??ｙｋｌｗＵｌｌｉｋｉｊｉＭ??图１．?ＭＣＦＤ２基因４号外显子基因序列，Ａ为先证者，Ｂ为其父亲，Ｃ为其母亲，??黑色箭头所指部位为突变位点，先证者发生ＭＣＦＤ２基因纯合错义突变ｇ．?３９８Ａ＞Ｔ??（Ｐ．Ｄ１３３Ｖ），３９８位碱基Ａ被Ｔ取代，引起１３３位氨基酸天冬氨酸被缬氨酸取??代，其父母该基因杂合突变。??第８页??

运用Ｃｌｕｓｔａｌ－Ｘ?２．?１软件进行同源序列比对，结果显示ＭＣＦＤ２第４号外显子??的１３３位氨基酸Ａｓｐ高度保守，而ＦＶＤＩ基因１４号外显子１６７１位氨基酸Ａｒｇ不是??高度保守序列，见图４．。ＰｏｌｙＰｈｅｎ－２软件分析Ａｓｐｌ３３Ｖａｌ对蛋白质破坏性极大，??分值为１．００，而Ａｒｇｌ６７１Ｈｉｓ分值为０．０４５，无法明确该突变的影响（最大分值??为１．００，０到１．００危险度逐步增高）；ＳＩＦＴ软件分析Ａｓｐｌ３３Ｖａｌ分值为０，对??蛋白质功能有较大影响，Ａｒｇｌ６７１Ｈｉｓ分值为０．?２６?（分值＜０．?０５即对蛋白质功能??影响较大）；ＰＲ０ＶＥＡＮ软件分析得出Ａｓｐｌ３３Ｖａｌ分值为－８．?７０８，带来的破坏性极??大，而Ａｒｇｌ６７１Ｈｉｓ分值为－０．?６６８，软件对该突变引起蛋白质结构和功能的影响??保持中立态度无法判断（对蛋白质功能有影响参考分界值为－２．５）。Ｍｕｔａｔｉｏｎ??Ｔｅａｓｅｒ软件分析Ａｓｐｌ３３Ｖａｌ引起氨基酸序列改变，可能影响蛋白质功能，??Ａｒｇｌ６７１Ｈｉｓ引起氨基酸替换，未提及对蛋白质功能的影响。ＰｙＭＯＬ软件构建ＭＣＨ３２??基因纯合突变前后蛋白质空间构象

【参考文献】：
期刊论文
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本文编号：3493804