基于JAK2/STAT3和p38MAPK信号通路探讨环磷酰胺联合甲氨蝶呤抑制类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞RANKL表达的
发布时间：2021-11-17 08:33
背景:类风湿关节炎（rheumatoid arthritis,RA）是一种滑膜细胞炎性增生、血管翳形成并侵蚀破坏软骨和骨的自身免疫性疾病。成纤维样滑膜细胞（fibroblast-like synoviocytes,FLS）是RA病变关节中血管翳和软骨连接处最常见的细胞类型。FLS通过产生细胞因子、趋化因子和基质降解分子,迁移至关节软骨处并侵蚀软骨和骨,导致受累关节组织结构破坏,引起关节功能障碍。在白细胞介素（interleukin,IL）-6、IL-17、肿瘤坏死因子（tumor necrosis factor,TNF）-α等炎性因子的激发下,RA-FLS表达核因子κB受体活化因子配体（receptor activator of nuclear factor-κB ligand,RANKL）增多,RANKL与破骨细胞前体细胞表面的核因子κB受体活化因子（receptor activator of nuclear factor-κB,RANK）特异结合,促进破骨细胞前体细胞的发育分化及成熟破骨细胞的活性,最终引起关节骨质侵蚀破坏。早期诊断、早期联合改善病情抗风湿药物（DMARDs）治疗对...
【文章来源】：山西医科大学山西省
【文章页数】：125 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
RA-FLS光镜下形态
图 2-2 RA-FLS 不同表面分子标记的流式直方图果显示，所培养的滑膜细胞表达 FLS 特异性表面黏附分子——钙黏附蛋herin-11），不表达滑膜巨噬细胞的特异性标记 CD14 和 HLA-DR，说明多次传代培养，已基本去除了滑膜巨噬细胞，培养体系中主要为均一性的同的 IL-6/sIL-6R 孵育浓度及不同孵育时间对 RA-FLS 表达 R响不同的 IL-6/sIL-6R 孵育浓度对 RA-FLS 表达 RANKL mRNA 水平的影响L-6 是 RA 受累关节炎性微环境中重要的炎性因子，本课题采用 IL-6 作的炎性刺激因子，并同时给予相同浓度的 sIL-6R，IL-6 与 sIL-6R 结合信号通路转导，并介导 FLS 上调表达 RANKL。
图 2-3 IL-6/sIL-6R 不同孵育浓度及孵育时间对 RA-FLS 表达 RANKL mRNA 水平的影响（a：不同浓度的 IL-6/sIL-6R 与 RA-FLS 进行孵育培养，IL-6/sIL-6R 浓度为 100 ng/ml 时，RANKmRNA 的表达水平最高；b：浓度为 100 ng/ml 的 IL-6/sIL-6R 与 RA-FLS 孵育不同的时间，孵时间至 72～96 h 时，RANKL mRNA 的表达呈高水平，且维持相对稳定的表达水平）结果显示，与 IL-6/sIL-6R 共同孵育培养 6 h 后，RANKL mRNA 的表达明显升高至 24 h 有下降趋势，随后孵育至 48 h，RANKL mRNA 的表达再次升高，至 72～96 hRANKL mRNA 维持比较稳定的高水平表达。根据上述研究结果，后续的实验均采用与干预药物共同孵育 72 h。2.3 MTT 实验分析不同干预药物对 RA-FLS 细胞活力的影响采用 MTT 法检测干预药物对 RA-FLS 细胞活力的影响。FLS 首先与 IL-6/sIL-6
【参考文献】：
期刊论文
[1]Changes in biological behaviors of rat dermal f ibroblasts induced by high expression of MMP9[J]. Sheng-neng Xue,Juan Lei,Diao-zhu Lin,Chuan Yang,Li Yan. World Journal of Emergency Medicine. 2014(02)
[2]Regulatory Roles of Metabolites in Cell Signaling Networks[J]. Feng Li,Wei Xu,Shimin Zhao. Journal of Genetics and Genomics. 2013(07)
[3]我国类风湿关节炎疾病负担和生存质量研究的系统评价[J]. 曾小峰,朱松林,谭爱春,谢小平. 中国循证医学杂志. 2013(03)
[4]RA滑膜成纤维细胞的原代培养及鉴定[J]. 丁娟,王志军,董晓薇,张淑雅,芦晓红,赵薇. 现代生物医学进展. 2012(36)
[5]甲氨蝶呤联合环磷酰胺治疗类风湿关节炎随机单盲对照临床研究[J]. 李小峰,张莉芸,牛红青,茹晋丽,王彩虹,高晋芳. 中华风湿病学杂志. 2010 (02)
[6]类风湿关节炎患者血清骨保护素水平及临床意义探讨[J]. 牛红青,张莉芸,李小峰,董海原,高晋芳,胡学芳. 中国药物与临床. 2009(03)
[7]RANKL/RANK/OPG系统及其在类风湿关节炎骨质破坏中的作用[J]. 牛红青,张莉芸,李小峰,刘雅妮. 中国药物与临床. 2008(05)
[8]周期联合甲氨蝶呤和环磷酰胺对大鼠胶原诱导性关节炎滑膜细胞周期蛋白D1表达的研究[J]. 王彩虹,李小峰,张奉春,曲世晶,梁美娥. 中华风湿病学杂志. 2008 (12)
[9]甲氨蝶呤联合环磷酰胺对胶原诱导性关节炎大鼠滑膜细胞p53表达的研究[J]. 曲世晶,李小峰,王彩虹,梁美娥. 中华风湿病学杂志. 2009 (01)
[10]甲氨蝶呤联合环磷酰胺对胶原诱导性关节炎大鼠炎症的研究[J]. 王彩虹,李小峰,张奉春,梁美娥,曲世晶. 中华风湿病学杂志. 2009 (08)
本文编号：3500542
【文章来源】：山西医科大学山西省
【文章页数】：125 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
RA-FLS光镜下形态
图 2-2 RA-FLS 不同表面分子标记的流式直方图果显示，所培养的滑膜细胞表达 FLS 特异性表面黏附分子——钙黏附蛋herin-11），不表达滑膜巨噬细胞的特异性标记 CD14 和 HLA-DR，说明多次传代培养，已基本去除了滑膜巨噬细胞，培养体系中主要为均一性的同的 IL-6/sIL-6R 孵育浓度及不同孵育时间对 RA-FLS 表达 R响不同的 IL-6/sIL-6R 孵育浓度对 RA-FLS 表达 RANKL mRNA 水平的影响L-6 是 RA 受累关节炎性微环境中重要的炎性因子，本课题采用 IL-6 作的炎性刺激因子，并同时给予相同浓度的 sIL-6R，IL-6 与 sIL-6R 结合信号通路转导，并介导 FLS 上调表达 RANKL。
图 2-3 IL-6/sIL-6R 不同孵育浓度及孵育时间对 RA-FLS 表达 RANKL mRNA 水平的影响（a：不同浓度的 IL-6/sIL-6R 与 RA-FLS 进行孵育培养，IL-6/sIL-6R 浓度为 100 ng/ml 时，RANKmRNA 的表达水平最高；b：浓度为 100 ng/ml 的 IL-6/sIL-6R 与 RA-FLS 孵育不同的时间，孵时间至 72～96 h 时，RANKL mRNA 的表达呈高水平，且维持相对稳定的表达水平）结果显示，与 IL-6/sIL-6R 共同孵育培养 6 h 后，RANKL mRNA 的表达明显升高至 24 h 有下降趋势，随后孵育至 48 h，RANKL mRNA 的表达再次升高，至 72～96 hRANKL mRNA 维持比较稳定的高水平表达。根据上述研究结果，后续的实验均采用与干预药物共同孵育 72 h。2.3 MTT 实验分析不同干预药物对 RA-FLS 细胞活力的影响采用 MTT 法检测干预药物对 RA-FLS 细胞活力的影响。FLS 首先与 IL-6/sIL-6
【参考文献】：
期刊论文
[1]Changes in biological behaviors of rat dermal f ibroblasts induced by high expression of MMP9[J]. Sheng-neng Xue,Juan Lei,Diao-zhu Lin,Chuan Yang,Li Yan. World Journal of Emergency Medicine. 2014(02)
[2]Regulatory Roles of Metabolites in Cell Signaling Networks[J]. Feng Li,Wei Xu,Shimin Zhao. Journal of Genetics and Genomics. 2013(07)
[3]我国类风湿关节炎疾病负担和生存质量研究的系统评价[J]. 曾小峰,朱松林,谭爱春,谢小平. 中国循证医学杂志. 2013(03)
[4]RA滑膜成纤维细胞的原代培养及鉴定[J]. 丁娟,王志军,董晓薇,张淑雅,芦晓红,赵薇. 现代生物医学进展. 2012(36)
[5]甲氨蝶呤联合环磷酰胺治疗类风湿关节炎随机单盲对照临床研究[J]. 李小峰,张莉芸,牛红青,茹晋丽,王彩虹,高晋芳. 中华风湿病学杂志. 2010 (02)
[6]类风湿关节炎患者血清骨保护素水平及临床意义探讨[J]. 牛红青,张莉芸,李小峰,董海原,高晋芳,胡学芳. 中国药物与临床. 2009(03)
[7]RANKL/RANK/OPG系统及其在类风湿关节炎骨质破坏中的作用[J]. 牛红青,张莉芸,李小峰,刘雅妮. 中国药物与临床. 2008(05)
[8]周期联合甲氨蝶呤和环磷酰胺对大鼠胶原诱导性关节炎滑膜细胞周期蛋白D1表达的研究[J]. 王彩虹,李小峰,张奉春,曲世晶,梁美娥. 中华风湿病学杂志. 2008 (12)
[9]甲氨蝶呤联合环磷酰胺对胶原诱导性关节炎大鼠滑膜细胞p53表达的研究[J]. 曲世晶,李小峰,王彩虹,梁美娥. 中华风湿病学杂志. 2009 (01)
[10]甲氨蝶呤联合环磷酰胺对胶原诱导性关节炎大鼠炎症的研究[J]. 王彩虹,李小峰,张奉春,梁美娥,曲世晶. 中华风湿病学杂志. 2009 (08)
本文编号：3500542
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