白藜芦醇通过自噬对RAW264.7细胞向破骨细胞分化的影响
发布时间：2021-11-20 02:36
目的:探讨不同浓度白藜芦醇对RAW264.7细胞向破骨细胞分化的影响并观察自噬在其中的变化及作用。方法:1.CCK-8检测不同浓度白藜芦醇（Resveratrol,RSV）对RAW264.7细胞及加入诱导剂RANKL向破骨细胞分化过程中各时间点细胞增殖的影响。2.诱导分化中加入不同浓度RSV,通过TRAP染色观察破骨细胞分化的程度;RT-PCR检测破骨相关标记物CTSK,MMP9,TRAP和自噬相关标记物LC3、Beclin-1、P62的mRNA表达情况;Western Blot检测自噬相关蛋白LC3II/I、Beclin-1、P62的表达情况;3.选择适宜浓度的RSV,并加入自噬抑制剂3-甲基嘌呤（3-Methyladenin,3-MA）分别检测破骨和自噬相关标记物mRNA及自噬相关蛋白的表达。结果:1.与对照组相比,RSV在0-1μmol/L范围干预12h对RAW264.7细胞的增殖无显著差异,随RSV浓度增加和干预时间延长,RAW264.7细胞增殖逐渐下降。与不处理组相比,加入RANKL均能促进RAW264.7细胞的增殖;RANKL诱导分化时同时加入0.1—10μmol/L的RS...
【文章来源】：兰州大学甘肃省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：53 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
不同浓度白藜芦醇对RAW264.7细胞增殖的影响
0.1 101.196±0.725 99.177±0.747 98.208±1.154 97.610±0.477*0.5 99.565±0.959 98.245±1.015* 96.922±0.799* 96.003±0.671*1 98.266±1.021 96.709±0.905* 95.612±0.537* 94.196±0.491*5 97.608±0.725* 95.837±0.614* 94.410±0.610* 93.694±0.656*10 97.667±0.496* 95.321±1.002* 93.091±0.710* 92.288±1.247*注：RAW264.7 细胞分别加入 0、0.1、0.5、1、5、10μΜ 的 RSV，干预 12、24、48、72h 时细胞的相对增殖。与不处理组比较* P<0.053.1.2 RANKL 及白藜芦醇对 RAW264.7 细胞增殖的影响如图 3-2 及表 3-2 所示：与不处理组相比，加入 50ng/mL 诱导剂 RANKL 均能促进 RAW264.7 细胞的增殖（P<0.05）；在 RANKL 诱导分化时同时加入不同浓度白藜芦醇（0.1、0.5、1、5、10μmol/L），细胞增殖先上升后逐渐下降，在0.5μmol/L 时细胞增殖最大。
23图 3-3 不同浓度白藜芦醇对破骨细胞分化的影响（20 10）：50ng/mL 的 RANKL 诱导 RAW264.7 细胞向破骨细胞分化过程中，加入 0、0.1、0.510μΜ 的 RSV，于培养第 5 天 TRAP 染色，通过 Image-Pro Plus 软件对 TRAP 染色阳域进行分析，计算 TRAP 染色阳性破骨细胞相对区域的百分比。与 RANKL 组比较*P<.3 白藜芦醇对破骨相关标记物 mRNA 表达的影响如图 3-4 和表 3-4 所示：与不处理组相比，加入 50ng/mL 诱导剂 RANKL促进破骨相关标记物 CTSK，MMP9，TRAP 的 mRNA 的表达。RANKL 诱化过程中同时加入不同浓度白藜芦醇干预，白藜芦醇浓度在 0.1μmol/L
【参考文献】：
期刊论文
[1]我国近5年来骨质疏松症流行病学研究现状[J]. 白璧辉,谢兴文,李鼎鹏,许伟,李宁,潘鑫戊. 中国骨质疏松杂志. 2018(02)
[2]小鼠单核巨噬细胞白血病细胞（RAW264.7）的培养及其在诱导破骨细胞中的应用[J]. 许丹,律颖,朱小语,陈晓文,冯金秋,范爱琴,许雅君. 中国骨质疏松杂志. 2016(10)
[3]自噬在破骨细胞分化过程中的调控作用[J]. 徐亦文,曹阳,安蒂,杨钰粒,黄施倩,许从峰. 现代免疫学. 2016(05)
[4]白藜芦醇抑制脂多糖诱导破骨前体细胞Raw264.7的激活[J]. 宗一,陈瑾,郭家智,张秀君,张铁军,孙林. 解剖学报. 2015(01)
[5]反式白藜芦醇对破骨细胞分化的影响[J]. 裴凌鹏. 河南师范大学学报(自然科学版). 2008(06)
[6]白藜芦醇对去卵巢大鼠股骨骨保护素及核因子κB受体活化子配体表达的影响[J]. 王艳,汤旭磊. 中国临床药理学与治疗学. 2008(03)
博士论文
[1]FoxO1介导白藜芦醇、葛根素抑制破骨细胞生成和活性的机制研究[D]. 冯燕陵.兰州大学 2018
本文编号：3506390
【文章来源】：兰州大学甘肃省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：53 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
不同浓度白藜芦醇对RAW264.7细胞增殖的影响
0.1 101.196±0.725 99.177±0.747 98.208±1.154 97.610±0.477*0.5 99.565±0.959 98.245±1.015* 96.922±0.799* 96.003±0.671*1 98.266±1.021 96.709±0.905* 95.612±0.537* 94.196±0.491*5 97.608±0.725* 95.837±0.614* 94.410±0.610* 93.694±0.656*10 97.667±0.496* 95.321±1.002* 93.091±0.710* 92.288±1.247*注：RAW264.7 细胞分别加入 0、0.1、0.5、1、5、10μΜ 的 RSV，干预 12、24、48、72h 时细胞的相对增殖。与不处理组比较* P<0.053.1.2 RANKL 及白藜芦醇对 RAW264.7 细胞增殖的影响如图 3-2 及表 3-2 所示：与不处理组相比，加入 50ng/mL 诱导剂 RANKL 均能促进 RAW264.7 细胞的增殖（P<0.05）；在 RANKL 诱导分化时同时加入不同浓度白藜芦醇（0.1、0.5、1、5、10μmol/L），细胞增殖先上升后逐渐下降，在0.5μmol/L 时细胞增殖最大。
23图 3-3 不同浓度白藜芦醇对破骨细胞分化的影响（20 10）：50ng/mL 的 RANKL 诱导 RAW264.7 细胞向破骨细胞分化过程中，加入 0、0.1、0.510μΜ 的 RSV，于培养第 5 天 TRAP 染色，通过 Image-Pro Plus 软件对 TRAP 染色阳域进行分析，计算 TRAP 染色阳性破骨细胞相对区域的百分比。与 RANKL 组比较*P<.3 白藜芦醇对破骨相关标记物 mRNA 表达的影响如图 3-4 和表 3-4 所示：与不处理组相比，加入 50ng/mL 诱导剂 RANKL促进破骨相关标记物 CTSK，MMP9，TRAP 的 mRNA 的表达。RANKL 诱化过程中同时加入不同浓度白藜芦醇干预，白藜芦醇浓度在 0.1μmol/L
【参考文献】：
期刊论文
[1]我国近5年来骨质疏松症流行病学研究现状[J]. 白璧辉,谢兴文,李鼎鹏,许伟,李宁,潘鑫戊. 中国骨质疏松杂志. 2018(02)
[2]小鼠单核巨噬细胞白血病细胞（RAW264.7）的培养及其在诱导破骨细胞中的应用[J]. 许丹,律颖,朱小语,陈晓文,冯金秋,范爱琴,许雅君. 中国骨质疏松杂志. 2016(10)
[3]自噬在破骨细胞分化过程中的调控作用[J]. 徐亦文,曹阳,安蒂,杨钰粒,黄施倩,许从峰. 现代免疫学. 2016(05)
[4]白藜芦醇抑制脂多糖诱导破骨前体细胞Raw264.7的激活[J]. 宗一,陈瑾,郭家智,张秀君,张铁军,孙林. 解剖学报. 2015(01)
[5]反式白藜芦醇对破骨细胞分化的影响[J]. 裴凌鹏. 河南师范大学学报(自然科学版). 2008(06)
[6]白藜芦醇对去卵巢大鼠股骨骨保护素及核因子κB受体活化子配体表达的影响[J]. 王艳,汤旭磊. 中国临床药理学与治疗学. 2008(03)
博士论文
[1]FoxO1介导白藜芦醇、葛根素抑制破骨细胞生成和活性的机制研究[D]. 冯燕陵.兰州大学 2018
本文编号：3506390
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