去甲基化酶FTO调控的m6A修饰在卵巢衰老中的作用及机制研究
发布时间：2021-11-23 21:21
随着经济发展和社会进程高速推进,我国人口结构也在向老龄化发展,女性生殖衰老是其中的一个重要话题。卵巢衰老（Ovarian aging）在临床上主要表现为卵巢储备功能减退（Diminished ovarian reserve,DOR）、早发性卵巢功能不全（Premature ovarian insufficiency,POI）及对促排卵药物的卵巢低反应（Poor ovarian response,POR）。其会导致女性卵泡对于促排卵药物的反应性下降,产生卵母细胞数量减少;卵母细胞发育潜能下降,导致不孕症的发生。卵泡是卵巢基本功能单位,其中颗粒细胞（Granolusa cells,GCs）是包绕在卵母细胞周围的一层或多层支持细胞,在卵泡发育的每一环节中都起着极为重要的作用。卵巢颗粒细胞与卵母细胞之间具有广泛的交流,通过多种自分泌和旁分泌途径,在不同时空具有不同的作用。其生长参与卵泡的募集,凋亡调控了卵泡的闭锁。在卵巢衰老进程中,颗粒细胞也是活性氧（Reactive oxygen species,ROS）和晚期糖基化终产物（Advanced glycation end products,AG...
【文章来源】：中国人民解放军海军军医大学上海市 211工程院校
【文章页数】：65 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
衰老卵巢的颗粒细胞m6A修饰异常增多Fig.1-1.Increasedm6Amodificationingranulosacellsofagedovary.Performed
去甲基化酶FTO调控的m6A修饰在卵巢衰老进程中的作用及机制研究-17-图1-2.去甲基化酶FTO在卵巢衰老患者颗粒细胞中的表达Fig.1-2.ExpressionofFTOingranulosacellsofOApatientsandcontrol.(A)qRT-PCRshowingmeanexpressionlevelsofm6A-associatedgenesofgranulosacellsinagedovaryandnegativecontrol.(B)IHCshowingaspecificexpressionofFTOingranulosacellsofovarytissue(Source:https://www.proteinatlas.org/ENSG00000140718-FTO/tissue/ovary#img).(C-D)WesternblotandimmunofluorescenceanalysisshowingthedownregulationofFTOinagedgranulosacellscomparisontoyoungcounterparts.Allexperimentswereperformedthreetimes.TheerrorbarsindicateSD;**p<0.01;
海军军医大学硕士学位论文-18-（三）卵巢颗粒细胞中FTO的表达受到ROS的调控既往文献[29]表明，氧化应激因素（ROS）是衰老最重要的相关因素之一；且有研究表明，氧化应激相关因素可以作用于颗粒细胞，导致颗粒细胞功能障碍[11]；在卵巢衰老进程中，抗氧化能力的下降也是灵长类生物卵巢衰老的主要特征之一[30]。因此我们思考，ROS是否可以导致卵巢颗粒细胞中的FTO水平降低，从而加速了卵巢颗粒细胞功能的变化，进而加速卵巢衰老进程？使用过氧化氢对卵巢颗粒细胞进行处理后发现，随着过氧化氢浓度的升高，COV434和KGN细胞的FTO蛋白丰度也随之降低（图1-3A）；而在RNA水平上也发现使用50uM过氧化氢处理后细胞的FTO表达降低（图1-3B）；同时，使用50uM过氧化氢处理后，细胞的m6A修饰显著增多（图1-3C）。图1-3.ROS可能是导致衰老卵巢颗粒细胞FTO水平异常及m6A修饰紊乱的原因Fig.1-3.ROSmaybethecauseoftheabnormalFTOlevelandthedisorderofm6Ainagedovariangranulosacells.(A)WesternblotshowingFTOdownregulateswiththeincreaseofH2O2.(B)qRT-PCRshowingmRNAofFTOdownregulatesbyH2O2.(C)Dotblotshowingm6AincreasedafterH2O2treatment.Allexperimentswereperformedthreetimes.TheerrorbarsindicateSD;*p<0.05,**p<0.01;
【参考文献】：
期刊论文
[1]中国生育报告2019[J]. 任泽平,熊柴,周哲. 发展研究. 2019(06)
本文编号：3514664
【文章来源】：中国人民解放军海军军医大学上海市 211工程院校
【文章页数】：65 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
衰老卵巢的颗粒细胞m6A修饰异常增多Fig.1-1.Increasedm6Amodificationingranulosacellsofagedovary.Performed
去甲基化酶FTO调控的m6A修饰在卵巢衰老进程中的作用及机制研究-17-图1-2.去甲基化酶FTO在卵巢衰老患者颗粒细胞中的表达Fig.1-2.ExpressionofFTOingranulosacellsofOApatientsandcontrol.(A)qRT-PCRshowingmeanexpressionlevelsofm6A-associatedgenesofgranulosacellsinagedovaryandnegativecontrol.(B)IHCshowingaspecificexpressionofFTOingranulosacellsofovarytissue(Source:https://www.proteinatlas.org/ENSG00000140718-FTO/tissue/ovary#img).(C-D)WesternblotandimmunofluorescenceanalysisshowingthedownregulationofFTOinagedgranulosacellscomparisontoyoungcounterparts.Allexperimentswereperformedthreetimes.TheerrorbarsindicateSD;**p<0.01;
海军军医大学硕士学位论文-18-（三）卵巢颗粒细胞中FTO的表达受到ROS的调控既往文献[29]表明，氧化应激因素（ROS）是衰老最重要的相关因素之一；且有研究表明，氧化应激相关因素可以作用于颗粒细胞，导致颗粒细胞功能障碍[11]；在卵巢衰老进程中，抗氧化能力的下降也是灵长类生物卵巢衰老的主要特征之一[30]。因此我们思考，ROS是否可以导致卵巢颗粒细胞中的FTO水平降低，从而加速了卵巢颗粒细胞功能的变化，进而加速卵巢衰老进程？使用过氧化氢对卵巢颗粒细胞进行处理后发现，随着过氧化氢浓度的升高，COV434和KGN细胞的FTO蛋白丰度也随之降低（图1-3A）；而在RNA水平上也发现使用50uM过氧化氢处理后细胞的FTO表达降低（图1-3B）；同时，使用50uM过氧化氢处理后，细胞的m6A修饰显著增多（图1-3C）。图1-3.ROS可能是导致衰老卵巢颗粒细胞FTO水平异常及m6A修饰紊乱的原因Fig.1-3.ROSmaybethecauseoftheabnormalFTOlevelandthedisorderofm6Ainagedovariangranulosacells.(A)WesternblotshowingFTOdownregulateswiththeincreaseofH2O2.(B)qRT-PCRshowingmRNAofFTOdownregulatesbyH2O2.(C)Dotblotshowingm6AincreasedafterH2O2treatment.Allexperimentswereperformedthreetimes.TheerrorbarsindicateSD;*p<0.05,**p<0.01;
【参考文献】：
期刊论文
[1]中国生育报告2019[J]. 任泽平,熊柴,周哲. 发展研究. 2019(06)
本文编号：3514664
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/nfm/3514664.html
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