抗SUMO抗体在多种自身免疫性疾病中的初步研究

发布时间：2021-11-24 22:20

　　目的:本研究通过构建质粒特异性的表达类泛素化修饰物（Small ubiquitin-related modifiers,SUMO）,并初步研究SUMO蛋白在原发性胆汁性胆管炎（Primary biliary cholangitis,PBC）,系统性红斑狼疮（Systemic lupus erythematosus,SLE）,类风湿性关节炎（Rheumatoid arthritis,RA）,干燥综合征（Sjogren syndrome,SS）多种典型性自身免疫性疾病患者血清中的表达水平,探究抗SUMO抗体是否可作为PBC的特异性血清标志物。并结合患者临床病历资料,探究SUMO与可溶性酸性磷酸化核蛋白（Acid soluble phosphorylated nuclear protein,Sp100）间的内在联系及对患者肝功能的影响。方法:1.利用PCR和ET克隆技术制备含有SUM01,SUM02,SUM03片段的质粒,将其分别导入大肠杆菌进行蛋白的诱导和表达,最后进行蛋白的纯化。2.采用斑点印迹法初步筛查原发性胆汁性胆管炎（PBC）患者血清样本中的SUMO阳性标本,并用Western b... 

【文章来源】：扬州大学江苏省

【文章页数】：76 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图１．２?ＳＵＭＯ化修饰途径［２２］??

目的蛋白以可溶性形式存在于破菌液的上清后，进行蛋白的大量表达与纯化。通过条件的??不断优化与改进，获得条带单一、纯度较高的目的蛋白，以供后续实验使用。三种蛋白亚??型纯化结果如图３．１所示。??Ｍ?ＳＵＭ０１?ＳＵＩＩ０２?ＳＵＭ０３?Ｍ??＝?Ｓ??４０ｋＤ?—??３５ｋＢ?一一??２５ｋＤ?一－一??ｍｍ?ｗ??！５ｋＤ?一?一??１０ｋＤ??图３．１三种ＳＵＭＯ蛋白亚型的纯化结果??注：图中Ｍ代表蛋白Ｍａｒｋｅｒ，目的蛋白在１７ｋＤ－１８ｋＤ左右。??３．２构建抗ＳＵＭＯ抗体ＥＬＩＳＡ的诊断体系??３．２．１获取抗ＳＵＭＯ抗体阳性样本??（１）采用斑点印迹法对３１９例ＰＢＣ患者样本进行抗ＳＵＭＯ抗体阳性的初步筛查。部??分结果如图３．２．１．１示。（纳入本实验ＰＢＣ样本血清ＡＭＡ－Ｍ２均为阳性）??

目的蛋白以可溶性形式存在于破菌液的上清后，进行蛋白的大量表达与纯化。通过条件的??不断优化与改进，获得条带单一、纯度较高的目的蛋白，以供后续实验使用。三种蛋白亚??型纯化结果如图３．１所示。??Ｍ?ＳＵＭ０１?ＳＵＩＩ０２?ＳＵＭ０３?Ｍ??＝?Ｓ??４０ｋＤ?—??３５ｋＢ?一一??２５ｋＤ?一－一??ｍｍ?ｗ??！５ｋＤ?一?一??１０ｋＤ??图３．１三种ＳＵＭＯ蛋白亚型的纯化结果??注：图中Ｍ代表蛋白Ｍａｒｋｅｒ，目的蛋白在１７ｋＤ－１８ｋＤ左右。??３．２构建抗ＳＵＭＯ抗体ＥＬＩＳＡ的诊断体系??３．２．１获取抗ＳＵＭＯ抗体阳性样本??（１）采用斑点印迹法对３１９例ＰＢＣ患者样本进行抗ＳＵＭＯ抗体阳性的初步筛查。部??分结果如图３．２．１．１示。（纳入本实验ＰＢＣ样本血清ＡＭＡ－Ｍ２均为阳性）??


本文编号：3516861