酸敏感离子通道1a介导的自噬对大鼠关节软骨细胞凋亡的影响

发布时间：2021-12-21 19:19

　　目的类风湿性关节炎（rheumatoid arthritis,RA）是一种慢性的系统性的自身免疫性疾病,最终导致关节的损伤和功能的丧失。本课题组前期研究首次发现,酸敏感离子通道1a（acid-sensing ion channel 1a,ASIC1a）在佐剂关节炎鼠模型（adjuvant-induced arthritis,AA）中显著高表达,且在AA大鼠软骨损伤的病理过程中起着至关重要的作用,进一步研究发现ASIC1a可能通过介导关节软骨细胞的自噬和凋亡参与RA病理过程。自噬和凋亡作为程序性死亡的两种形式,二者间的关系密切又复杂。本研究主要目的是探讨ASIC1a介导的自噬对大鼠关节软骨细胞凋亡的影响,探讨自噬在RA发病进程中的作用。方法建立体内AA大鼠模型,分别致炎0天,15天,25天,35天,观察自噬和凋亡的动态变化;在体内实验中选用阿米洛利（amiloride）阻断AA大鼠的ASIC1a,观察ASIC1a与自噬和凋亡的相关性;在体内和体外实验中,选用特异性抑制剂3-甲基腺嘌呤（3-methyladenine,3-MA）和诱导剂雷帕霉素（Rapamycin,Rapa）阻断或诱导自噬... 

【文章来源】：安徽医科大学安徽省

【文章页数】：88 页

【学位级别】：硕士

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1 前言
2 实验材料
    2.1 实验动物
    2.2 实验仪器和实验设备
    2.3 实验药物、试剂和抗体
    2.4 试剂的配制
3 实验方法
    3.1 AA大鼠模型的制备、动物分组、及给药方案
    3.2 体重指数和关节炎评分
    3.3 ELISA检测血浆炎症因子
    3.4 大鼠踝关节病理学检测
    3.5 Tunel & immunofluorescence双染检测自噬和凋亡的共表达
    3.6 分离与培养原代大鼠关节软骨细胞
    3.7 Annexin V-FICT/PI流式检测软骨细胞的凋亡率
    3.8 Hochst 33342 染色法检测软骨细胞的形态学变化
    3.9 Western Blot
    3.10 统计学分析
4 实验结果
    4.1 体内实验
        4.1.1 AA大鼠模型的不同时期
        4.1.2 ASIC1a介导AA大鼠关节软骨细胞自噬
        4.1.3 ASIC1a与细胞凋亡的相关性
        4.1.4 ASIC1a介导的自噬对大鼠关节软骨细胞的影响
        4.1.5 ASIC1a介导的自噬抑制大鼠关节软骨细胞的凋亡
    4.2 体外实验
        4.2.1 3-MA抑制自噬上调大鼠软骨细胞凋亡
        4.2.2 Rapa诱导自噬下调大鼠软骨细胞凋亡
5 讨论
6 结论
7 参考文献
附录
致谢
综述
    参考文献



本文编号：3545031