IL-10对胰腺功能影响的研究
发布时间：2021-12-22 21:15
背景:糖尿病已经成为威胁全球人类健康的非传染性疾病之一,根据世界卫生组织的报道,高血糖在全球范围内,成为继烟草及高血压之后,第三致死的威胁因素。据国际糖尿病联盟的最新数据统计,2016年全球已有约4.15亿18岁以上糖尿病患者,据估计,18岁以上糖尿病患者将在2040年增加至6.42亿人。1型糖尿病仅占糖尿病的10%至15%,它是一种Th1介导的自身免疫性疾病,主要表现为抗原特异性T细胞选择性破坏产生胰岛素的胰腺?细胞。而白介素10（Interleukin-10,IL-10）作为一种有效的抗炎细胞因子,是Th1型免疫反应的强抑制剂。基因靶向破坏内源性IL-10使机体对原本非病原性的炎症刺激极为敏感,并放大了Th1介导的炎症反应。因此预期当机体缺乏IL-10时可能会发展为自身免疫性糖尿病,虽然已有研究表明IL-10缺乏的NOD（非肥胖糖尿病）小鼠中自发性糖尿病的发生率与对照的NOD小鼠相似,但是当非NOD小鼠缺乏IL-10时是否会发展为自身免疫性糖尿病还是未知的。目的:本研究希望通过利用IL-10基因敲除小鼠,探究IL-10缺乏是否是1型糖尿病的发病机制之一,并且进一步探究IL-10的缺...
【文章来源】：电子科技大学四川省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：51 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
型糖尿病中，细胞损伤与各类免疫细胞的关系
电子科技大学硕士学位论文12（9）弃上清，沉淀加入4ml1.1-Ficoll充分重悬并转移至15ml离心管内，然后依次加入2ml1.096-Ficoll以及2ml1.066-Ficoll，加入时要尽量缓慢，注意液面分层。将该15ml离心管放入离心机，以升速1，降速0，速度2000rpm，室温离心20分钟。（10）离心结束后，用巴氏吸管将中间白色胰岛层吸出，并加入含有10%胎牛血清DMEM的培养皿中，在冰上画圈摇晃培养皿，中间聚集的圆形颗粒即为胰岛细胞，在显微镜下可观察到圆形细胞团（如图2-1（b）所示）。(a)（b）图2-1小鼠胰岛细胞的分离。（a）充盈的胰腺组织;（b）在显微镜下观察的分离的胰岛细胞2.2.4实时荧光定量PCR2.2.4.1提取样本总RNA以下操作都置于冰上操作：（1）将分离的胰岛细胞转移至无RNA酶的EP管中，加入1mlTrizol，用移液枪反复吹打，使Trizol与胰岛细胞充分作用。（2）加入200ml氯仿，涡旋混匀后室温放置，待有明确分层液面时，放入4℃离心机，离心15分钟。（3）吸取上清液于新的无RNA酶EP管中，加入等体积已提前预冷的异丙醇，涡旋颠倒混匀，-20℃冰箱中放置30分钟。（4）4摄氏度离心10分钟后弃去上清，加入1ml无水乙醇后轻弹EP管进行漂洗。（5）4摄氏度离心10分钟后弃去上清，加入1ml75%乙醇后轻弹EP管进行漂洗。
电子科技大学硕士学位论文18（a）（b）（c）（d）图3-1IL-10敲除小鼠基因鉴定。（a）IL-10-/-小鼠基因构建示意图；（b）引物设计示意图；（c)小鼠基因型鉴定的琼脂糖电泳示意图；（d）实时荧光定量PCR结果显示，KO小鼠与WT小鼠相比IL-10表达显著性降低，****P＜0.0001，ns表示无显著差异3.2IL-10基因敲除对小鼠基本体征的影响3.2.1IL-10基因敲除对小鼠体重的影响小鼠出生4周后每隔2天测量一次小鼠体重，分为WT、Het、KO组，每组测量小鼠20只。结果见图3-2（a），在小鼠出生6周左右时，WT和KO小鼠的体重已经有了显著性差异差异，这一结果与上文提到的IL-10-/-小鼠会在出生后8-10周自发发展为结肠炎的结果一致[12]，因为结肠炎的主要临床病理特征之一就是体重下降。同时，Het小鼠与WT体重变化情况基本一致。
【参考文献】：
期刊论文
[1]Elusive liver factor that causes pancreatic α cell hyperplasia: A review of literature[J]. Run Yu,Yun Zheng,Matthew B Lucas,Yun-Guang Tong. World Journal of Gastrointestinal Pathophysiology. 2015(04)
[2]Pathologic pancreatic endocrine cell hyperplasia[J]. Debra Ouyang,Deepti Dhall. World Journal of Gastroenterology. 2011(02)
本文编号：3547104
【文章来源】：电子科技大学四川省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：51 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
型糖尿病中，细胞损伤与各类免疫细胞的关系
电子科技大学硕士学位论文12（9）弃上清，沉淀加入4ml1.1-Ficoll充分重悬并转移至15ml离心管内，然后依次加入2ml1.096-Ficoll以及2ml1.066-Ficoll，加入时要尽量缓慢，注意液面分层。将该15ml离心管放入离心机，以升速1，降速0，速度2000rpm，室温离心20分钟。（10）离心结束后，用巴氏吸管将中间白色胰岛层吸出，并加入含有10%胎牛血清DMEM的培养皿中，在冰上画圈摇晃培养皿，中间聚集的圆形颗粒即为胰岛细胞，在显微镜下可观察到圆形细胞团（如图2-1（b）所示）。(a)（b）图2-1小鼠胰岛细胞的分离。（a）充盈的胰腺组织;（b）在显微镜下观察的分离的胰岛细胞2.2.4实时荧光定量PCR2.2.4.1提取样本总RNA以下操作都置于冰上操作：（1）将分离的胰岛细胞转移至无RNA酶的EP管中，加入1mlTrizol，用移液枪反复吹打，使Trizol与胰岛细胞充分作用。（2）加入200ml氯仿，涡旋混匀后室温放置，待有明确分层液面时，放入4℃离心机，离心15分钟。（3）吸取上清液于新的无RNA酶EP管中，加入等体积已提前预冷的异丙醇，涡旋颠倒混匀，-20℃冰箱中放置30分钟。（4）4摄氏度离心10分钟后弃去上清，加入1ml无水乙醇后轻弹EP管进行漂洗。（5）4摄氏度离心10分钟后弃去上清，加入1ml75%乙醇后轻弹EP管进行漂洗。
电子科技大学硕士学位论文18（a）（b）（c）（d）图3-1IL-10敲除小鼠基因鉴定。（a）IL-10-/-小鼠基因构建示意图；（b）引物设计示意图；（c)小鼠基因型鉴定的琼脂糖电泳示意图；（d）实时荧光定量PCR结果显示，KO小鼠与WT小鼠相比IL-10表达显著性降低，****P＜0.0001，ns表示无显著差异3.2IL-10基因敲除对小鼠基本体征的影响3.2.1IL-10基因敲除对小鼠体重的影响小鼠出生4周后每隔2天测量一次小鼠体重，分为WT、Het、KO组，每组测量小鼠20只。结果见图3-2（a），在小鼠出生6周左右时，WT和KO小鼠的体重已经有了显著性差异差异，这一结果与上文提到的IL-10-/-小鼠会在出生后8-10周自发发展为结肠炎的结果一致[12]，因为结肠炎的主要临床病理特征之一就是体重下降。同时，Het小鼠与WT体重变化情况基本一致。
【参考文献】：
期刊论文
[1]Elusive liver factor that causes pancreatic α cell hyperplasia: A review of literature[J]. Run Yu,Yun Zheng,Matthew B Lucas,Yun-Guang Tong. World Journal of Gastrointestinal Pathophysiology. 2015(04)
[2]Pathologic pancreatic endocrine cell hyperplasia[J]. Debra Ouyang,Deepti Dhall. World Journal of Gastroenterology. 2011(02)
本文编号：3547104
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