PI3K信号通路对结节病和1型糖尿病中Treg稳态的作用及机制研究
发布时间：2021-12-31 16:33
第一部分:选择性抑制PI3K介导肺结节病小鼠模型Th1/Th17/Treg再平衡的研究背景:结节病是一种病因不明的多系统免疫性疾病,病理表现为不同器官内非干酪样肉芽肿,主要累及肺。研究证明,结节病的发病机制与Th1（T helper 1 cell）/Th17（T helper 17 cell）/Treg（Regulatory T cell）紊乱相关。PI3K（Phosphatidylinositol 3-kinase）/Akt（protein kinase B;PKB（Akt））通路对于维持Treg的功能及稳态至关重要,在结节病患者中异常激活。在我们的前期研究中发现同时抑制4种Ⅰ类PI3K亚基的BKM120比选择性抑制p110α,β和δ亚基的LY294002能更有效地诱导Treg稳态,提示结节病中Treg的水平和功能可能更依赖于p110γ亚基。目的:在本研究中我们选用两种PI3K亚基的特异性抑制剂AS-605240（特异性抑制PI3Kp110γ亚基）和CAL-101（特异性抑制PI3Kp110δ亚基）,探究特异性干预p110γ和p110δ亚基是否能通过恢复Treg的免疫调节能力,从而减...
【文章来源】：南京大学江苏省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：71 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
结节病小鼠模型建构图
南京大学硕士毕业论文26ANOVA)，P<0.05认为差异有统计学意义。3.结果3.1肺结节病小鼠的建立及模型验证我们根据Swaisgood的方法[50]，通过两次SodA免疫应激，构建小鼠结节病模型并给药（图1）。图1.结节病小鼠模型建构图。6周大雌性C57BL/6J小鼠，第1天给予第一次免疫刺激，第15天给予第二次免疫刺激并同时进行药物干预，第16、29、30、36、37天再次给予药物干预，第43天处理小鼠，取样进行后期分析。首先，我们对结节病小鼠成模情况进行了验证。小鼠肺组织经过固定、包埋，H&E染色。结果显示，与正常小鼠相比，结节病模型小鼠肺部存在明显的由上皮样细胞和淋巴细胞聚集而成的肉芽肿结（图2）。图2.肺部病理。肺组织H&E染色。放大倍数×100。接着，我们对各组小鼠的BALF和淋巴结中的CD4+T细胞、CD8+T细胞进行了流式统计。结果显示，与临床结节病患者一致，结节病组小鼠BALF中CD4+/CD8+T细胞比例显著性增加（6.523±2.108vs.1.168±0.266%，P=0.0012），而在淋巴结中CD4+/CD8+T细胞比例没有明显变化（图3）。
南京大学硕士毕业论文27图3.CD4+/CD8+T细胞比例变化。A.肺泡灌洗液中CD4+/CD8+T细胞比例变化。B.淋巴结中CD4+/CD8+T细胞比例变化。（**P<0.01，每组n=5）此外，我们还对BALF中的Th1细胞、Th2细胞、Th17细胞和Treg细胞进行了流式分析。结果显示，与正常组相比，结节病组BALF中Th1、Th17细胞比例显著增高（24.70±4.082vs.4.268±0.376%，P=0.0025；7.523±1.108vs.3.168±0.626%，P=0.0142）,而Treg细胞比例明显减少（2.643±0.508vs.3.681±0.236%，P=0.0003）（图4）。说明在结节病小鼠中出现了Th1/Th17/Treg紊乱。图4.淋巴结中Th1细胞、Th2细胞、Th17细胞和Treg细胞比例。A.淋巴结中CD4+IFNγ+T细胞比例。B.淋巴结中CD4+IL-4+T细胞比例。C.淋巴结中IL-17A+IFNγ+T细胞比例。D.淋巴结中CD25+FoxP+T细胞比例。（*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001，每组n=5）。然后，我们对小鼠肺组织进行了免疫荧光染色，与正常小鼠相比结节病小鼠肺部肉芽肿周围PI3K信号出现明显激活（图5）。
本文编号：3560599
【文章来源】：南京大学江苏省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：71 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
结节病小鼠模型建构图
南京大学硕士毕业论文26ANOVA)，P<0.05认为差异有统计学意义。3.结果3.1肺结节病小鼠的建立及模型验证我们根据Swaisgood的方法[50]，通过两次SodA免疫应激，构建小鼠结节病模型并给药（图1）。图1.结节病小鼠模型建构图。6周大雌性C57BL/6J小鼠，第1天给予第一次免疫刺激，第15天给予第二次免疫刺激并同时进行药物干预，第16、29、30、36、37天再次给予药物干预，第43天处理小鼠，取样进行后期分析。首先，我们对结节病小鼠成模情况进行了验证。小鼠肺组织经过固定、包埋，H&E染色。结果显示，与正常小鼠相比，结节病模型小鼠肺部存在明显的由上皮样细胞和淋巴细胞聚集而成的肉芽肿结（图2）。图2.肺部病理。肺组织H&E染色。放大倍数×100。接着，我们对各组小鼠的BALF和淋巴结中的CD4+T细胞、CD8+T细胞进行了流式统计。结果显示，与临床结节病患者一致，结节病组小鼠BALF中CD4+/CD8+T细胞比例显著性增加（6.523±2.108vs.1.168±0.266%，P=0.0012），而在淋巴结中CD4+/CD8+T细胞比例没有明显变化（图3）。
南京大学硕士毕业论文27图3.CD4+/CD8+T细胞比例变化。A.肺泡灌洗液中CD4+/CD8+T细胞比例变化。B.淋巴结中CD4+/CD8+T细胞比例变化。（**P<0.01，每组n=5）此外，我们还对BALF中的Th1细胞、Th2细胞、Th17细胞和Treg细胞进行了流式分析。结果显示，与正常组相比，结节病组BALF中Th1、Th17细胞比例显著增高（24.70±4.082vs.4.268±0.376%，P=0.0025；7.523±1.108vs.3.168±0.626%，P=0.0142）,而Treg细胞比例明显减少（2.643±0.508vs.3.681±0.236%，P=0.0003）（图4）。说明在结节病小鼠中出现了Th1/Th17/Treg紊乱。图4.淋巴结中Th1细胞、Th2细胞、Th17细胞和Treg细胞比例。A.淋巴结中CD4+IFNγ+T细胞比例。B.淋巴结中CD4+IL-4+T细胞比例。C.淋巴结中IL-17A+IFNγ+T细胞比例。D.淋巴结中CD25+FoxP+T细胞比例。（*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001，每组n=5）。然后，我们对小鼠肺组织进行了免疫荧光染色，与正常小鼠相比结节病小鼠肺部肉芽肿周围PI3K信号出现明显激活（图5）。
本文编号：3560599
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/nfm/3560599.html
最近更新
教材专著
