孤核受体NR4A1增强胰岛β细胞中GPX1的表达及相关机制研究

发布时间：2022-01-01 20:55

　　糖尿病是一种对人类健康有严重危害的代谢性疾病,而胰岛β细胞的凋亡是1型和2型糖尿病发病机制的重要环节。我们前期的研究表明,孤核受体NR4A1能够抵抗由氧自由基（ROS）或氧化应激所引起的胰岛β细胞凋亡。谷胱甘肽过氧化物酶1（GPX1）,作为谷胱甘肽过氧化物酶类中最多见的抗氧化酶,在抵抗由氧自由基（ROS）或氧化应激引起的细胞凋亡方面发挥十分重要的作用。因此,孤核受体NR4A1是否通过调控GPX1的表达来抵抗胰岛β细胞凋亡及相应的分子机制有待探索。本研究中,在构建过表达NR4A1的胰岛β细胞（MIN6）的基础上,用不同的方法检测GPX1的表达变化,并使用萤火虫酶检测NR4A1对GPX1启动子活性的影响及其作用方式。然后,在过表达GPX1的MIN6细胞中,用H2O2进行不同方式的处理,来模拟细胞所处的氧化应激状态,检测氧化应激状态下活化的Caspase3的水平变化。结果显示:在MIN6细胞中,过表达NR4A1能够使GPX1的表达量升高,双荧光素酶实验结果显示:NR4A1能够提高GPX1启动子的转录活性。经检索发现在GPX1启动子上（-273至-268）含有NR4A1的潜在结合位点。ChIP... 

【文章来源】：山东大学山东省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：64 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图１鉴定ＭＩＮ６与对照细胞中ＮＲ４Ａ１的过表达效果

为了多方位验证ｃＤＮＡＭｉｃｒｏａｒｒａｙ的结果，对ＮＣ、ＯＶ细胞提取蛋白质及??ｍＲＮＡ进行Ｗｅｓｔｅｒｎ?Ｂｌｏｔ及ｑＰＣＲ检测，其实验结果与Ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ的结果一致，??即过表达ＮＲ４Ａ１之后，无论是蛋白水平（图３Ａ，户＝０．０００８），还是ｍＲＮＡ水平??（图３Ｂ，Ｐ＝０．０１９７），ＧＰＸ１表达量均显著升高，结果具有统计学差异，与之前??Ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ?结果一致。??３６??

动子２０００?ｂｐ长度（Ｐ＝０．００１８）和４０００?ｂｐ长度（Ｐ＝０．００１６）的转录活性均显著增强，??结果均具有统计学差异。结果表明：过表达ＮＲ４Ａ１对于２０００?ｂｐ长度ＧＰＸ１启??动子转录活性的增强不低于４０００?ｂｐ长度启动子的转录活性（图４），提示ＮＲ４Ａ１??发挥效应的区域主要在０到－２０００?ｂｐ内。??＞５］??？专?＊＊?ｎ?ｎｃ??§?４－?■〇ｖ??ｌＵ＿ｎｉ??２０００ｂｐ?４０００ｂｐ??图４?ＮＲ４Ａ１对ＧＰＸ１?２０００?ｂｐ长度启动子和４０００?ｂｐ长度启动子活性的影响，＊＊尸＜?０．０１，??与ＮＣ细胞相比。??Ｆｉｇ．４?Ｅｆｆｅｃｔｓ?ｏｆ?ＮＲ４Ａ１?ｏｎ?ＧＰＸ１?ｐｒｏｍｏｔｅｒ?ｔｒａｎｓａｃｔｉｖａｔｉｏｎ，?ｂｏｔｈ?２０００?ｂｐ?ｐｒｏｍｏｔｅｒ?ａｎｄ?４０００?ｂｐ??ｐｒｏｍｏｔｅｒ?ｏｆ?ＧＰＸ１?ｗｅｒｅ?ａｐｐｌｉｅｄ?ｆｏｒ?ａｎａｌｙｓｉｓ，?＊＊Ｐ＜?０．０１，?ｖｓ．ＮＣ．??３．?２?ＮＲ４Ａ１跟ＧＰＸ１启动子有物理结合??通过对ＧＰＸ］启动子序列进行分析发现，在４０００?ｂｐ长度的启动子上存在三??个ＮＲ４Ａｌ的潜在结合位点（ＴＧＡＣＣＴ），其中一个是位于?２０００ｂｐ范围内，比较??接近转录起始位点的位置（－２７３至－２６８），而另外两个结合位点之间较为靠近，??但位于距离转录起始位点较远的位置（－３４３７至－３４３２，－３６２６至－３６２１），示意图如??图５Ａ。考虑到ＮＲ４Ａ１对两个长度的ＧＰＸ１转录活性的影响


本文编号：3562827