铅暴露对PC12细胞内IGF1R、IGFBP3、Aβ40及Aβ42表达的影响
发布时间：2022-01-23 13:33
目的:探讨铅暴露及IGF1R抑制剂（AG1024）对PC12细胞内IGF1R、IGFBP3表达的影响,明确诱发AD的相关蛋白的作用机制,是否通过它们的调节作用,从而为铅中毒的预防和治疗提供理论指导。方法:用PC12神经元细胞株进行培养建立相应的铅暴露模型,分别用不同浓度的乙酸铅处理细胞,把实验分为对照组、1μmol/L PbAc、10μmol/L PbAc组、IGF1R抑制剂（AG1024）组、IGF1R抑制剂组（AG1024）+1μmol/L PbAc组、IGF1R抑制剂组（AG1024）+10μmol/L PbAc组,分别染毒三个时间段24h、48h和72h,MTT法测定铅暴露剂量对细胞增殖的影响,分别通过western blot技术和细胞免疫化学法检测各组PC12细胞中IGF1R,IGFBP3的蛋白表达情况,ELISA法测定细胞上清液中Aβ40、Aβ42表达。MTT结果显示,这三个时间段用不同浓度的PbAc处理细胞显示处理组的OD490值与暴露浓度呈显著相关性,暴露浓度越高,吸光度值显著下降,与对照组相比同一处理时间的组别中,只有低剂量暴露的0.1μmol/L组没有显著性差异,其...
【文章来源】：河南农业大学河南省
【文章页数】：54 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
体外培养72h的PC12细胞不同铅暴露浓度的形态学观察（10×10）
2 细胞 IGF1R 蛋白表达结果与分析显示，与对照组相比，低剂量铅暴露组（0.1μmol/L）IGF1R 蛋白表达IGF1R 蛋白在 1μM 和 10μM 醋酸铅组细胞中的表达则明显低于对照意义，P<0.05，中高浓度铅暴露显著抑制了细胞体系中 IGF1R 蛋白的量的升高，该抑制效应越明显。课题组前期体内实验表明，免疫组化法与对照组相比，0.1%、0.5%和 1%PbAc 组在仔鼠海马中 IGF1R 表达显实验结果一致，表明铅暴露下调 IGF1R 的表达，在我们的水迷宫实验比对照组差[113]。在老化过程中神经元 IGF1-R 表达的增加与 AD 的发生上，在脑老化和体外培养的老年神经元中，信号通路被激活下游的 IG β 肽(Aβ)的产生增加，其异常积累被认为是 AD 疾病发展的主要因素[ β-淀粉状蛋白产生中的 IGF1R 信号传导可能参与 AD 的发展。1R 15510μmol/L PbAc 1μmol/L PbAc 0.1μmol/L PbAc 对照组
图 2 醋酸铅处理 72h 对 PC12 细胞内 IGF1R 蛋白相对表达量的变化Fig. 2 changes of relative expression of IGF1R protein in PC12 cells treated with lead acetate for 72注：ANOVA 与对照组比较，*P<0.05，其值代表 IGF1R/β-actin 强度的比值。5.免疫荧光法测定 IGF1R 蛋白在各实验组的差异表达用免疫荧光分析技术对 IGF1R 的表达及分布、转移进行了定位，IGF1R 蛋白主要在浆中表达，呈红色，A 对照组细胞生长良好，神经元细胞形态、树突完整，B 组出现胞核坏死、突起短的现象，C 组细胞凋亡较严重，神经元细胞大部分树突消失，D 抑较 A 组明显抑制细胞生长，E 组和 F 组表明抑制剂和铅联合组对细胞有不同程度的应。图 3 记录了 PC12 细胞空白对照组和铅暴露组 IGF1R 的免疫荧光分析结果。研究表露组 IGF1R 蛋白活性与空白组 IGF1R 蛋白活性相比，出现了明显的下降趋势。1剂量铅暴露组 IGF1R 免疫荧光抗体的平均光密度和神经元活性较对照组显著降低，有统计学意义（P<0.05）其中高剂量（10μmol/L）显著性差异下降趋势最为明显，与blot 结果一致。
【参考文献】：
期刊论文
[1]橘皮素对PC-12细胞Aβ水平的影响及机制研究[J]. 欧阳新平,郑莉,周寿红,陆素青,陈歆,张敏,何平平,唐朝克. 中南医学科学杂志. 2017(02)
[2]IGF-1R抑制剂AG1024对头颈鳞癌FaDu细胞放射敏感性的影响[J]. 俞立萍,李萍,章青,徐文才,李兆斌,傅深. 中国癌症杂志. 2012(07)
[3]阻断胰岛素样生长因子-1受体信号传导路径对人乳腺癌细胞放射增敏作用机制研究[J]. 李萍,章青,李兆斌,徐文才,孙宜,傅深. 中华放射肿瘤学杂志. 2012 (01)
[4]大蒜素对人胃癌SGC7901细胞生长的影响[J]. 刘超侠,孔庆兖. 徐州医学院学报. 2010(09)
[5]胰岛素样生长因子-1神经保护作用的研究进展[J]. 刘薇,张祥建. 中国卒中杂志. 2008(08)
[6]胰岛素样生长因子结合蛋白-3[J]. 漆正堂. 生命的化学. 2003(02)
[7]胰岛素样生长因子1受体激活机制及信号转导特异性[J]. 刘宝英,王会信. 生理科学进展. 1998(03)
[8]粉碎机涂漆引起食品高铅污染探讨[J]. 刘延江,姚为民,袁浩. 中国卫生监督杂志. 1995(04)
博士论文
[1]铅致阿尔茨海默症样变神经毒性及对相关通路蛋白表达的影响[D]. 李星.郑州大学 2017
[2]生命早期铅暴露在阿尔茨海默病样变进程中的作用及分子机制[D]. 刘芳丽.郑州大学 2014
本文编号：3604446
【文章来源】：河南农业大学河南省
【文章页数】：54 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
体外培养72h的PC12细胞不同铅暴露浓度的形态学观察（10×10）
2 细胞 IGF1R 蛋白表达结果与分析显示，与对照组相比，低剂量铅暴露组（0.1μmol/L）IGF1R 蛋白表达IGF1R 蛋白在 1μM 和 10μM 醋酸铅组细胞中的表达则明显低于对照意义，P<0.05，中高浓度铅暴露显著抑制了细胞体系中 IGF1R 蛋白的量的升高，该抑制效应越明显。课题组前期体内实验表明，免疫组化法与对照组相比，0.1%、0.5%和 1%PbAc 组在仔鼠海马中 IGF1R 表达显实验结果一致，表明铅暴露下调 IGF1R 的表达，在我们的水迷宫实验比对照组差[113]。在老化过程中神经元 IGF1-R 表达的增加与 AD 的发生上，在脑老化和体外培养的老年神经元中，信号通路被激活下游的 IG β 肽(Aβ)的产生增加，其异常积累被认为是 AD 疾病发展的主要因素[ β-淀粉状蛋白产生中的 IGF1R 信号传导可能参与 AD 的发展。1R 15510μmol/L PbAc 1μmol/L PbAc 0.1μmol/L PbAc 对照组
图 2 醋酸铅处理 72h 对 PC12 细胞内 IGF1R 蛋白相对表达量的变化Fig. 2 changes of relative expression of IGF1R protein in PC12 cells treated with lead acetate for 72注：ANOVA 与对照组比较，*P<0.05，其值代表 IGF1R/β-actin 强度的比值。5.免疫荧光法测定 IGF1R 蛋白在各实验组的差异表达用免疫荧光分析技术对 IGF1R 的表达及分布、转移进行了定位，IGF1R 蛋白主要在浆中表达，呈红色，A 对照组细胞生长良好，神经元细胞形态、树突完整，B 组出现胞核坏死、突起短的现象，C 组细胞凋亡较严重，神经元细胞大部分树突消失，D 抑较 A 组明显抑制细胞生长，E 组和 F 组表明抑制剂和铅联合组对细胞有不同程度的应。图 3 记录了 PC12 细胞空白对照组和铅暴露组 IGF1R 的免疫荧光分析结果。研究表露组 IGF1R 蛋白活性与空白组 IGF1R 蛋白活性相比，出现了明显的下降趋势。1剂量铅暴露组 IGF1R 免疫荧光抗体的平均光密度和神经元活性较对照组显著降低，有统计学意义（P<0.05）其中高剂量（10μmol/L）显著性差异下降趋势最为明显，与blot 结果一致。
【参考文献】：
期刊论文
[1]橘皮素对PC-12细胞Aβ水平的影响及机制研究[J]. 欧阳新平,郑莉,周寿红,陆素青,陈歆,张敏,何平平,唐朝克. 中南医学科学杂志. 2017(02)
[2]IGF-1R抑制剂AG1024对头颈鳞癌FaDu细胞放射敏感性的影响[J]. 俞立萍,李萍,章青,徐文才,李兆斌,傅深. 中国癌症杂志. 2012(07)
[3]阻断胰岛素样生长因子-1受体信号传导路径对人乳腺癌细胞放射增敏作用机制研究[J]. 李萍,章青,李兆斌,徐文才,孙宜,傅深. 中华放射肿瘤学杂志. 2012 (01)
[4]大蒜素对人胃癌SGC7901细胞生长的影响[J]. 刘超侠,孔庆兖. 徐州医学院学报. 2010(09)
[5]胰岛素样生长因子-1神经保护作用的研究进展[J]. 刘薇,张祥建. 中国卒中杂志. 2008(08)
[6]胰岛素样生长因子结合蛋白-3[J]. 漆正堂. 生命的化学. 2003(02)
[7]胰岛素样生长因子1受体激活机制及信号转导特异性[J]. 刘宝英,王会信. 生理科学进展. 1998(03)
[8]粉碎机涂漆引起食品高铅污染探讨[J]. 刘延江,姚为民,袁浩. 中国卫生监督杂志. 1995(04)
博士论文
[1]铅致阿尔茨海默症样变神经毒性及对相关通路蛋白表达的影响[D]. 李星.郑州大学 2017
[2]生命早期铅暴露在阿尔茨海默病样变进程中的作用及分子机制[D]. 刘芳丽.郑州大学 2014
本文编号：3604446
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/nfm/3604446.html
最近更新
教材专著
