N-乙酰半胱氨酸对糖尿病大鼠肾脏足细胞的保护作用及其机制研究

发布时间：2017-05-13 20:03

  本文关键词：N-乙酰半胱氨酸对糖尿病大鼠肾脏足细胞的保护作用及其机制研究，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的： 足细胞即肾小囊脏层上皮细胞,是一种独特的、终末分化细胞。足细胞作为肾小球滤过屏障结构的重要组成部分,由于其特殊结构和独特膜蛋白分子决定了其在肾小球中的重要地位,也决定了其损伤在糖尿病肾病发生与发展中扮演重要角色。目前多项研究显示足细胞数量和密度、足细胞裂孔隔膜及细胞骨架结构改变、足细胞内相关信号分子及信号通路的异常激活均与糖尿病肾病密切相关。本研究通过动态观察足细胞的标志性蛋白WT1,足细胞裂孔隔膜的关键分子之一nephrin,由足细胞分泌在糖尿病肾病中发挥重要作用的VEGF蛋白表达水平,并给予NAC进行干预,探讨NAC对于糖尿病大鼠肾脏足细胞的保护机制。 方法： 1.以Wistar大鼠为实验动物建立糖尿病模型(一次性STZ尾静脉注射)。随机分为正常、糖尿病及干预组,观察时间为6周和12周。 2.检测肾功能、尿蛋白；光镜下观察大鼠肾脏组织病理学改变,通过免疫组化法观察nephrin、WT1及VEGF蛋白表达水平,通过Western blot法检测足细胞裂孔隔膜蛋白nephrin表达水平。 3.应用Image-Pro Plus6.0软件分析免疫组化图像平均IOD值,应用Image J分析Western blot图像目标带光密度值。各组间数据比较采用单因素方差分析(ANOVA)。 结果： 1.成功建立糖尿病大鼠模型。 2.与同期对照组相比,糖尿病组及干预组大鼠血糖明显升高,体重显著下降,尿量明显增加。光镜下可见糖尿病组大鼠肾小球体积增大,部分肾小球萎缩；系膜细胞及系膜基质增生,系膜区明显增宽,甚至弥漫性系膜硬化；大量肾小管上皮细胞发生空泡变性,炎性细胞浸润,以上表现符合糖尿病肾病病理表现。NAC干预组与同期糖尿病组比较,系膜细胞及细胞外基质增生减轻,炎性细胞浸润减少。 3.糖尿病组及干预组大鼠肾脏nephrin表达水平显著低于同期对照组,差异有统计学意义(P0.05)。与同期糖尿病组相比,干预组nephrin表达水平有所升高,差异有统计学意义(P0.05)。免疫组化染色可见,与正常组相比较,同期糖尿病组及干预组棕黄色物质颜色变浅,排列方式发生改变。经NAC干预后免疫组化染色颜色有所加深。 4.糖尿病组及干预组大鼠肾脏WT1免疫组化染色较同期对照组颜色变淡,平均IOD值明显降低,差异有统计学意义(P0.05)。经NAC干预后WT1免疫组化染色有所加深,差异有统计学意义(P0.05)。 5.与同期对照组相比,糖尿病组及干预组大鼠肾脏VEGF表达水平明显升高,差异有统计学意义(P0.05)。糖尿病组及干预组大鼠肾脏VEGF免疫组化染色着色明显增加。与同期糖尿病组相比,干预组大鼠肾脏VEGF表达水平有所下降,差异有统计学意义(P0.05),免疫组化染色后可见着色变淡。 结论： 1.成功建立糖尿病肾病大鼠模型,肾功能异常的同时出现肾组织nephrin、WTl表达减少,VEGF表达增加。 2.NAC治疗可以减少尿蛋白排泄,具有肾脏保护作用。 3.NAC可能通过上调足细胞nephrin蛋白表达水平,维持裂孔隔膜结构完整性；减少足细胞损伤及脱落；改善血管通透性,减少系膜细胞和系膜基质增生等途径发挥肾脏保护作用。
【关键词】：糖尿病肾病 足细胞 N-乙酰半胱氨酸 nephrin WT1 VEGF
【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R587.2
【目录】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-11
• 缩略语/符号说明11-12
• 前言12-15
• 研究现状、成果12-14
• 研究目的、方法14-15
• 1. 研究对象15-18
• 1.1 实验对象15
• 1.2 主要仪器与设备15
• 1.3 药品及试剂15-16
• 1.4 主要实验试剂的配制16-18
• 2. 研究方法18-25
• 2.1 第一次随机分组18
• 2.2 造模18
• 2.3 第二次随机分组18
• 2.4 干预方法18
• 2.5 标本收集及指标检测18-19
• 2.6 肾组织病理学检测19-21
• 2.7 Western-blot法检测肾小球nephrin蛋白的表达21-25
• 2.8 统计学分析25
• 3. 结果25-29
• 3.1 成功建立糖尿病大鼠模型25-27
• 3.2 各组大鼠光镜下肾脏病理结果27-28
• 3.3 各组大鼠nephrin蛋白Western blot检测的结果28-29
• 3.4 相关性分析29
• 4. 讨论29-40
• 4.1 糖尿病肾病动物模型的建立29-31
• 4.2 足细胞与糖尿病肾病31-37
• 4.3 NAC对糖尿病肾病的保护作用37-40
• 结论40-41
• 参考文献41-47
• 发表论文和参加科研情况说明47-48
• 附录48-51
• 综述51-62
• 综述参考文献57-62
• 致谢62

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前10条

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本文编号：363470