色氨酸-2,3-双加氧酶2在胶原诱导关节炎小鼠免疫细胞中的表达及其对巨噬细胞吞噬功能的调控作用和机制
发布时间：2022-07-11 18:27
类风湿关节炎（rheumatoid arthritis,RA）是一种以关节滑膜炎症为病理特征的慢性系统性自身免疫病,目前其发病机制尚不明确。大量研究表明,RA发病机制和疾病进程与固有免疫细胞、适应性免疫细胞和成纤维样滑膜细胞（fibroblast-like synoviocyte,FLS）等各种细胞以及肿瘤坏死因子（tumor neurosis factor,TNF）和前列腺素E2（prostaglandin E2,PGE2）等炎性介质共同作用密切相关。色氨酸（tryptophan,Trp）作为哺乳动物体内的必需氨基酸,通过参与蛋白质和核酸合成维持细胞生理活动,以及产生活性代谢物等对机体的免疫调节功能发挥重要作用。机体95%以上的Trp通过犬尿氨酸途径（kynurenine pathway,KP）代谢,已有研究表明KP代谢异常在RA的病理机制中发挥重要作用。色氨酸-2,3-双加氧酶2（tryptophan-2,3-dioxygenase2,TDO2）、吲哚-2,3-双加氧酶1（indoleamine-2,3-dioxygenase1,IDO1）和吲哚-2,3-双加氧酶2（indolea...
【文章页数】：78 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
英文缩略词表(Abbreviation)
摘要
Abstract
1 前言
2 实验材料
2.1 动物
2.2 细胞株
2.3 药物与试剂
2.4 主要溶液配制
2.5 仪器与设备
3 实验方法
3.1 免疫组化法检测DBA/1小鼠组织中TDO2蛋白的表达
3.2 RT-qPCR法检测DBA/1小鼠组织中TDO2的mRNA表达
3.3 DBA/1小鼠脾脏和淋巴结免疫细胞的分离
3.4 流式细胞术检测DBA/1小鼠脾脏T、B细胞亚群、NK和DC中TDO2表达
3.5 成像流式细胞术检测DBA/1小鼠脾脏T、B细胞亚群、NK和DC中TDO2表达
3.6 小鼠腹腔巨噬细胞的分离、原代培养和鉴定
3.7 激光共聚焦法检测DBA/1小鼠PM中 TDO2 的表达
3.8 小鼠CIA模型的建立
3.9 CIA小鼠胸腺指数和脾脏指数测定
3.10 CIA小鼠踝关节、脾脏和肝脏病理的观察
3.11 RT-qPCR法检测CIA小鼠腹腔巨噬细胞中TDO2 mRNA的表达
3.12 Raw264.7细胞株的分组处理
3.13 RT-q PCR法检测Raw264.7细胞中TDO2和EP4的mRNA表达
3.14 比色法检测Raw264.7细胞上清中Kyn含量
3.15 流式细胞术检测Raw264.7细胞的吞噬功能
3.16 统计学处理
4 结果
4.1 DBA/1小鼠各种组织中TDO2 mRNA和蛋白表达
4.2 TDO2在DBA/1小鼠脾脏和肠系膜淋巴结免疫细胞中的表达
4.3 TDO2在DBA/1小鼠免疫细胞中的表达
4.4 TDO2在DBA/1小鼠PM中的表达
4.5 CIA小鼠的整体指标评价和病理学变化
4.5.1 CIA小鼠整体指标的评价
4.5.2 CIA小鼠踝关节、脾脏和肝脏的病理学变化
4.6 TDO2在CIA小鼠踝关节、脾脏和肝脏中的表达
4.7 TDO2在CIA小鼠脾脏和肠系膜淋巴结免疫细胞中的表达
4.7.1 TDO2小鼠在CIA小鼠脾脏T细胞亚群中的表达
4.7.2 TDO2在CIA小鼠脾脏B细胞亚群中的表达
4.7.3 TDO2在CIA小鼠脾脏DC和NK细胞中的表达
4.7.4 TDO2在CIA小鼠肠系膜淋巴结免疫细胞中的表达
4.8 TDO2在CIA小鼠PM细胞中的表达
4.9 TDO2 siRNA最佳序列的选择
4.10 TDO2对Raw264.7细胞吞噬功能的影响
4.11 PGE2不同浓度刺激后对Raw264.7细胞的吞噬能力以及对TDO2表达和酶活性的影响
4.11.1 不同浓度PGE2刺激后对Raw264.7细胞吞噬能力的影响
4.11.2 不同浓度PGE2刺激后对Raw264.7细胞TDO2 mRNA和蛋白表达的影响
4.11.3 不同浓度PGE2刺激后对Raw264.7细胞TDO2酶活性的影响
4.12 EP4 选择性激动剂对Raw264.7吞噬功能和TDO2 mRNA表达和活性的影响
4.12.1 EP4 选择性激动剂CAY10598对Raw264.7的吞噬功能的影响
4.12.2 CAY10598对Raw264.7细胞TDO2 mRNA表达的影响
4.12.3 CAY10598对Raw264.7的TDO2酶,活性的影响
4.13 TDO2对Raw264.7细胞EP4mRNA表达的影响
5 讨论
6 结论
7 参考文献
附录
致谢
综述:色氨酸-2,3-双加氧酶2:治疗癌症、神经退行性疾病和炎症的潜在靶点
参考文献
【参考文献】：
博士论文
[1]G蛋白偶联受体激酶2介导PGE2-EP4-cAMP-CREB信号转导异常参与CIA小鼠巨噬细胞极化及CP-25的作用[D]. 杨雪枝.安徽医科大学 2019
硕士论文
[1]革巴向IgD-IgDR抑制剂，IgD-Fc-Ig融合蛋白对小鼠胶原性关节炎的治疗作用及对T细胞活性的调控[D]. 张静.安徽医科大学 2019
本文编号：3658658
【文章页数】：78 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
英文缩略词表(Abbreviation)
摘要
Abstract
1 前言
2 实验材料
2.1 动物
2.2 细胞株
2.3 药物与试剂
2.4 主要溶液配制
2.5 仪器与设备
3 实验方法
3.1 免疫组化法检测DBA/1小鼠组织中TDO2蛋白的表达
3.2 RT-qPCR法检测DBA/1小鼠组织中TDO2的mRNA表达
3.3 DBA/1小鼠脾脏和淋巴结免疫细胞的分离
3.4 流式细胞术检测DBA/1小鼠脾脏T、B细胞亚群、NK和DC中TDO2表达
3.5 成像流式细胞术检测DBA/1小鼠脾脏T、B细胞亚群、NK和DC中TDO2表达
3.6 小鼠腹腔巨噬细胞的分离、原代培养和鉴定
3.7 激光共聚焦法检测DBA/1小鼠PM中 TDO2 的表达
3.8 小鼠CIA模型的建立
3.9 CIA小鼠胸腺指数和脾脏指数测定
3.10 CIA小鼠踝关节、脾脏和肝脏病理的观察
3.11 RT-qPCR法检测CIA小鼠腹腔巨噬细胞中TDO2 mRNA的表达
3.12 Raw264.7细胞株的分组处理
3.13 RT-q PCR法检测Raw264.7细胞中TDO2和EP4的mRNA表达
3.14 比色法检测Raw264.7细胞上清中Kyn含量
3.15 流式细胞术检测Raw264.7细胞的吞噬功能
3.16 统计学处理
4 结果
4.1 DBA/1小鼠各种组织中TDO2 mRNA和蛋白表达
4.2 TDO2在DBA/1小鼠脾脏和肠系膜淋巴结免疫细胞中的表达
4.3 TDO2在DBA/1小鼠免疫细胞中的表达
4.4 TDO2在DBA/1小鼠PM中的表达
4.5 CIA小鼠的整体指标评价和病理学变化
4.5.1 CIA小鼠整体指标的评价
4.5.2 CIA小鼠踝关节、脾脏和肝脏的病理学变化
4.6 TDO2在CIA小鼠踝关节、脾脏和肝脏中的表达
4.7 TDO2在CIA小鼠脾脏和肠系膜淋巴结免疫细胞中的表达
4.7.1 TDO2小鼠在CIA小鼠脾脏T细胞亚群中的表达
4.7.2 TDO2在CIA小鼠脾脏B细胞亚群中的表达
4.7.3 TDO2在CIA小鼠脾脏DC和NK细胞中的表达
4.7.4 TDO2在CIA小鼠肠系膜淋巴结免疫细胞中的表达
4.8 TDO2在CIA小鼠PM细胞中的表达
4.9 TDO2 siRNA最佳序列的选择
4.10 TDO2对Raw264.7细胞吞噬功能的影响
4.11 PGE2不同浓度刺激后对Raw264.7细胞的吞噬能力以及对TDO2表达和酶活性的影响
4.11.1 不同浓度PGE2刺激后对Raw264.7细胞吞噬能力的影响
4.11.2 不同浓度PGE2刺激后对Raw264.7细胞TDO2 mRNA和蛋白表达的影响
4.11.3 不同浓度PGE2刺激后对Raw264.7细胞TDO2酶活性的影响
4.12 EP4 选择性激动剂对Raw264.7吞噬功能和TDO2 mRNA表达和活性的影响
4.12.1 EP4 选择性激动剂CAY10598对Raw264.7的吞噬功能的影响
4.12.2 CAY10598对Raw264.7细胞TDO2 mRNA表达的影响
4.12.3 CAY10598对Raw264.7的TDO2酶,活性的影响
4.13 TDO2对Raw264.7细胞EP4mRNA表达的影响
5 讨论
6 结论
7 参考文献
附录
致谢
综述:色氨酸-2,3-双加氧酶2:治疗癌症、神经退行性疾病和炎症的潜在靶点
参考文献
【参考文献】：
博士论文
[1]G蛋白偶联受体激酶2介导PGE2-EP4-cAMP-CREB信号转导异常参与CIA小鼠巨噬细胞极化及CP-25的作用[D]. 杨雪枝.安徽医科大学 2019
硕士论文
[1]革巴向IgD-IgDR抑制剂，IgD-Fc-Ig融合蛋白对小鼠胶原性关节炎的治疗作用及对T细胞活性的调控[D]. 张静.安徽医科大学 2019
本文编号：3658658
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