SDF-1在间充质干细胞中诱导的CXCR4/CXCR7表达的变化及其与PI3K/NF-κB信号转导通路关系的研究

发布时间：2022-08-12 16:24

　　目的:探讨经间充质细胞衍生因子-1（SDF-1）诱导后间充质干细胞（MSCs）中趋化因子受体4（CXCR4）/趋化因子受体7（CXCR7）表达的变化及其与磷脂酰肌醇3激酶（Phosphoinositide 3-kinase,PI3K）/核因子-κB（Nuclear factor kappa B,NF-κB）信号通路的关系,为后期研究提供实验依据。方法:（1）全骨髓贴壁培养法分离、培养、纯化MSCs;（2）分别通过逆转录PCR（RT-PCR）和蛋白免疫印迹法（Western-blot）检测不同浓度SDF-1诱导前后MSCs中CXCR4和CXCR7 mRNA和蛋白水平的表达变化;（3）分别以CXCR4拮抗剂AMD3100、CXCR7拮抗剂CCX733、PI3K抑制剂渥曼青霉素（Wortmanin）和NF-κB抑制剂二硫代氨基吡咯烷（PDTC）作为工具药,通过RT-PCR和Western-blot法检测MSCs中CXCR4和CXCR7在基础状态和干预状态下mRNA、蛋白水平的表达变化;（4）用Western-blot法观察间充质干细胞中蛋白激酶B（Akt）、NF-κB抑制蛋白（IΚBα）的基... 

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【学位级别】：硕士

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中文摘要
ABSTRACT
英汉缩略词对照表
前言
第一部分 大鼠骨髓间充质干细胞（MSCs）分离培养、鉴定和不同浓度SDF-1 诱导前后MSCs中CXCR4和CXCR7的表达
    1 材料方法
        1.1 实验材料和仪器
            1.1.1 实验动物
            1.1.2 主要实验试剂
            1.1.3 主要实验仪器
        1.2 实验方法
            1.2.1 MSCs的分离培养、纯化
            1.2.2 流式细胞仪检测MSCs表面标记物
            1.2.3 实验分组
            1.2.4 RT-PCR检测不同浓度SDF-1 诱导前后MSCs的CXCR4和CXCR7的表达
            1.2.5 Western-blot法检测不同浓度SDF-1 诱导前后MSCs的CXCR4和CXCR7的表达
        1.3 统计分析
    2 结果
        2.1 MSCs形态学表现
        2.2 流式细胞仪鉴定 MSCs 表面标志物
        2.3 不同浓度SDF-1 诱导前后MSCs的CXCR4和CXCR7 mRNA的表达
        2.4 不同浓度SDF-1 诱导前后MSCs的CXCR4和CXCR7蛋白的表达
    3 讨论
    4 结论
第二部分CXCR4和CXCR7在基础状态和干预状态下表达变化及与PI3K/NF- κ B信 号转导机制相关性的研究
    1 材料与方法
        1.1 实验材料和仪器
            1.1.1 实验材料
            1.1.2 主要实验试剂
            1.1.3 主要实验仪器
        1.2 实验方法
            1.2.1 细胞制备及分组
            1.2.2 RT-PCR检测CXCR4和CXCR7在不同条件诱导下mRNA表达的变化
            1.2.3 Western-blot法检测CXCR4和CXCR7在不同条件诱导下蛋白水平的表达变化
            1.2.4 Western-blot法检测Akt和IΚBα在不同条件诱导下蛋白水平的表达变化
        1.3 统计分析
    2 结果
        2.1 MSCs中CXCR4和CXCR7 mRNA水平的表达
        2.2 WESTERN BLOT检测MSCs中CXCR4 ， CXCR7蛋白表达
        2.3 WESTERN BLOT检测MSCs中Akt，p-Akt，IΚBα，p- IΚBα蛋白表达
    3 讨论
    4 结论
参考文献
综述
    参考文献
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致谢



本文编号：3676208