焦亡介导高糖引起的小鼠胚胎成骨细胞MC3T3-E1炎症与损伤

发布时间：2022-10-04 18:31

　　目的:探讨细胞焦亡（pyroptosis）能否介导高糖（HG;45 mmol/L葡萄糖）引起的小鼠胚胎成骨细胞MC3T3-E1炎症和损伤。方法:应用细胞计数试剂盒8（CCK-8）检测成骨细胞活力;Western blot测定成骨细胞的核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3（NLRP3）和胱天蛋白酶1（CASP1）的表达水平;ELISA法测定细胞培养上清液中白细胞介素18（IL-18）和IL-1β的水平;2’,7’-二氯二氢荧光素二乙酯染色荧光显微镜照相法检测胞内活性氧（ROS）水平;罗丹明123染色荧光显微镜照相法测定线粒体膜电位（MMP）水平;碱性磷酸酶（ALP）试剂盒测定成骨细胞早期标志物ALP的活性;茜素红染色观察成骨细胞晚期标志物矿化结节的形成。结果:HG处理MC3T3-E1细胞24 h可明显促进NLRP3和CASP1的表达,引起IL-18和IL-1β的分泌增多,同时可使细胞活力降低,ROS生成和MMP丢失增加,成骨细胞分化与矿化功能下降（表现为ALP活性降低和矿化结节数量减少）。利用siRNA沉默CASP1表达可显著减轻HG引起的上述成骨细胞炎症和损伤。结论:焦亡可介导HG引起的... 

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【文章目录】：
材料和方法
    1 材料
    2 方法
        2.1 细胞培养
        2.2 实验分组
        2.3 CASP1-siRNA细胞转染和最佳干扰序列的筛选
        2.4 成骨细胞诱导分化
        2.5 CCK-8法测定细胞存活率
        2.6 Western blot法检测NLRP3和CASP1蛋白表达水平
        2.7 ELISA法检测IL-18和IL-1β水平
        2.8 DCFH-DA染色荧光显微镜照相法检测细胞内ROS水平
        2.9 Rh123染色荧光显微镜测定成骨细胞线粒体膜电位（mitochondrial membrane potential,MMP)
        2.1 0 ALP活性测定
        2.1 1 茜素红钙化结节染色
    3 统计学处理
结果
    1 HG上调成骨细胞NLRP3和CASP1蛋白的表达
    2 CASP1-siRNA最佳干扰序列的筛选
    3 沉默CASP1基因抑制HG对成骨细胞的毒性
    4 沉默CASP1基因减少HG引起的成骨细胞炎症因子分泌
    5 沉默CASP1基因抑制HG引起的成骨细胞氧化应激反应
    6 沉默CASP1基因抑制HG引起的MMP丢失
    7 沉默CASP1基因减轻HG对ALP活性的抑制
    8 沉默CASP1基因可对抗HG引起的矿化结节数量减少
讨论


【参考文献】：
期刊论文
[1]WJD 5h Anniversary Special Issues（1）:Insulin Insulin and bone:Recent developments[J]. Gordon L Klein.  World Journal of Diabetes. 2014(01)
[2]高糖通过提高ROS水平和钙超载诱导小鼠MC3T3-E1成骨细胞凋亡[J]. 郭宝磊,杨茂伟,梁单,曹军军,杨蕾,郭晓东.  中国病理生理杂志. 2012(02)



本文编号：3685548