RhoA/ROCK信号通路在氟致小鼠智力损伤中的作用及其机制
发布时间：2022-10-21 16:55
课题组前期研究结果发现:氟中毒可引起子代大鼠大脑皮层和海马神经元的病理学损伤、神经细胞凋亡、DNA损伤、学习认知能力下降以及细胞骨架相关蛋白MAP2的表达显著抑制。细胞骨架损伤在氟诱导智力紊乱过程中的作用如何?本研究以此为切入点,ICR小鼠和Neuro-2A细胞为研究对象,研究细胞骨架蛋白在氟中毒发生机制中的作用。1氟化钠对子代小鼠大脑皮层神经细胞骨架及突触相关蛋白表达的影响本研究通过自由饮用含氟水（0,50,100mg/L）建立氟中毒ICR子代小鼠模型,以0d,10 d,20 d,30 d,60 d和90 d子代小鼠大脑皮层为研究对象,研究细胞骨架损伤在氟致神经损伤过程中发挥的作用。采用水迷宫试验测定60 d子代小鼠学习记忆能力,结果显示氟处理组小鼠的学习记忆能力受到显著影响,潜伏期显著延长,并且穿过目标象限次数减少。HE染色观察到氟处理组大脑皮层锥体细胞数量减少,胶质细胞核皱缩和碎裂。氟暴露组小鼠大脑皮质MAP2、SYP和Dbn的mRNA和蛋白表达水平均不同程度受到抑制,谷氨酸受体蛋白的表达也出现下降趋势（P＞0.05）。推断,氟抑制了骨架蛋白和突触相关蛋白表达,继而影响中枢神经系...
【文章页数】：93 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
摘要
第一章 文献综述
1 氟对中枢神经系统的影响
1.0 氟污染现状
1.1 氟对中枢神经系统的病理学损伤
1.2 氟对智力发育的影响
2 氟中毒的致病机理
2.1 氟影响自由基生成和氧化应激
2.2 氟引起细胞凋亡的发生
2.3 其它元素对氟中毒效应的影响
3 细胞骨架在神经系统中的作用
3.1 细胞骨架的组成与功能
3.2 细胞骨架在神经细胞功能发挥中的作用
3.3 细胞骨架装配对神经细胞功能的影响
4 氟中毒与信号通路的关系
4.1 RhoA信号通路
4.2 氟中毒与其他信号通路的关系
5 目前研究存在的问题与本研究的意义
参考文献
第二章 氟化钠对子代小鼠大脑皮层神经元细胞骨架及突触相关蛋白表达的影响
1 试验材料
1.1 试验试剂
1.2 仪器设备
1.3 试验动物
1.4 取材方法
2 试验方法
2.1 子代小鼠学习记忆能力检测
2.2 病理组织学染色
2.3 Real-time PCR检测基因表达变化
2.4 Western blot检测蛋白表达量的变化
2.5 数据分析
3 结果与分析
3.1 氟中毒对子代小鼠脑重/体重的影响
3.2 氟中毒对子代小鼠学习记忆能力的影响
3.3 氟暴露子代小鼠大脑皮层病理学变化
3.4 氟中毒对子代小鼠大脑MAP2表达量的影响
3.5 氟中毒对子代小鼠大脑SYP和Dbn表达量的影响
3.6 氟中毒对子代小鼠大脑谷氨酸受体蛋白表达量的影响
4 讨论
参考文献
第三章 氟化钠对神经细胞骨架损伤及神经信号传递的影响
1 试验材料
1.1 试验试剂
1.2 仪器设备
1.3 细胞培养
2 试验方法
2.1 氟暴露对神经细胞形态的影响
2.2 MTT法检测细胞存活率
2.3 氟对神经细胞膜通透性的影响
2.4 神经细胞F-actin染色
2.5 细胞超微结构的变化
2.6 Western blot检测MAP2和SYP蛋白的表达
2.7 谷氨酸的测定
2.8 谷氨酸受体的表达
2.9 数据分析
3 结果与分析
3.1 细胞形态学观察
3.2 NaF对神经细胞存活率和细胞膜通透性的影响
3.3 NaF对细胞骨架的影响
3.4 NaF对神经细胞超微结构的影响
3.5 NaF对神经细胞MAP2和SYP蛋白表达量的影响
3.6 NaF对谷氨酸及其受体蛋白的影响
4 讨论
参考文献
第四章 氟化钠对神经细胞RhoA/ROCK信号通路的影响
1 试验材料
1.1 试验试剂及配方
1.2 细胞培养
2 试验方法
2.1 酵母双杂交筛选MAP2互作蛋白
2.2 神经细胞骨架染色
2.3 氟暴露对神经细胞微管相关蛋白Tau mRNA表达的影响
2.4 氟暴露对神经细胞RhoA/ROCK信号通路相关基因转录水平的变化
2.5 氟暴露对神经细胞Tau蛋白表达的影响
2.6 氟暴露对神经细胞RhoA/ROCK信号通路相关蛋白的影响
2.7 Y-27632对神经细胞形态的影响
2.8 Y-27632对神经细胞存活率的影响
2.9 Y-27632对神经细胞RhoA/ROCK信号通路的影响
2.10 Y-27632对神经细胞骨架相关蛋白表达的影响
2.11 数据分析
3 结果与分析
3.1 MAP2互作蛋白的筛选结果
3.2 氟暴露对神经细胞骨架的影响
3.3 氟暴露对神经细胞Tau蛋白表达的影响
3.4 氟暴露对大脑皮层神经元中Tau蛋白的表达的影响
3.5 氟激活了神经细胞RhoA/ROCK信号通路
3.6 氟暴露子代小鼠大脑皮层神经元中RhoA/ROCK信号通路的激活
3.7 Y-27632对神经细胞形态学的影响
3.8 Y-27632能缓解氟对神经细胞存活率的抑制作用
3.9 Y-27632对神经细胞RhoA/ROCK信号通路的抑制作用
3.10 抑制RhoA/ROCK信号通路对细胞骨架相关蛋白表达的影响
4 讨论
参考文献
全文总结
Abstract
缩略词
个人简介
后记
【参考文献】：
期刊论文
[1]Nestin蛋白在白血病及其他恶性血液肿瘤中的研究进展[J]. 王艳飞,梅芬,撒亚莲. 生命科学. 2016(07)
[2]Rho A/Rho kinase in spinal cord injury[J]. Xiangbing Wu,Xiao-ming Xu. Neural Regeneration Research. 2016(01)
[3]慢性氟中毒致学习记忆损伤的脑内突触机制[J]. 章子贵,孙岩,郑祥仁. 浙江师范大学学报(自然科学版). 2015(01)
[4]中国地方病防治杂志2009～2013年刊载地方性氟中毒文献分析[J]. 高超,张爱君. 中国地方病防治杂志. 2014(06)
[5]非常规肌球蛋白与突触可塑性[J]. 邢方凯,罗鹏,张吉强. 生命的化学. 2012(01)
[6]氧化和化学应激的防御性转导通路——Nrf2/ARE[J]. 蔡维霞,张军,胡大海. 中国生物化学与分子生物学报. 2009(04)
[7]急性氟中毒小鼠大脑皮层神经元DNARNA和NOS的活性观察[J]. 周红军,李积胜,王国明. 微量元素与健康研究. 2008(01)
[8]氟化钠导致小鼠神经细胞凋亡的研究[J]. 王俊玲. 毒理学杂志. 2007(05)
[9]神经微丝与视神经病变[J]. 邓秋琼,刘金华. 中国实用眼科杂志. 2006(07)
[10]氟中毒及其相关研究技术[J]. 王金明,刘海涛,马俊杰,王俊东. 动物医学进展. 2006(03)
博士论文
[1]基于多组学分析的马氏珠母贝矿化相关基因研究[D]. 郑哲.广东海洋大学 2017
[2]体内外研究CXCL1诱导以caspase-3为依赖的微管相关蛋白Tau的剪切[D]. 张晓芳.昆明医科大学 2016
[3]水稻中激素和肌醇磷酸代谢相关基因的抗逆功能研究[D]. 都浩.华中农业大学 2013
[4]RhoA/Rho激酶信号通路在心肌肥厚及糖尿病心肌病中的作用研究[D]. 关胜江.河北医科大学 2009
[5]中间丝蛋白Nestin在肾小管上皮细胞转分化中表达的研究[D]. 尤莉.复旦大学 2008
[6]新生未成熟大鼠少突胶质前体细胞缺氧缺糖模型中RhoA和细胞骨架蛋白的研究[D]. 钟琳.四川大学 2007
硕士论文
[1]围产期氟暴露对仔鼠学习记忆及海马中miR-124与miR-132表达的影响[D]. 张玉良.山西农业大学 2016
[2]糖浓度增加致海马神经元MLCK升高对细胞微丝骨架的影响[D]. 杜贵琴.贵州医科大学 2016
[3]氟对小鼠海马神经毒性作用及相关基因的影响[D]. 陈慧娟.山西农业大学 2015
[4]不同钙水平对氟致大鼠骨组织细胞凋亡线粒体通路的作用[D]. 张东芳.山西农业大学 2014
[5]高氟对体外培养SD大鼠大脑皮质神经细胞毒性研究[D]. 李冲.河南科技学院 2014
[6]不同饮食钙条件对饮水型氟中毒致子代脑发育的干预作用[D]. 钱炜.浙江师范大学 2014
[7]氟、砷暴露对仔鼠生长发育和学习记忆能力的影响及其机制研究[D]. 李明艳.河北联合大学 2014
[8]内质网应激在氟致神经干细胞凋亡中的作用[D]. 雷蓉蓉.华中科技大学 2013
[9]重组腺相关病毒神经肽Y基因转染对红藻氨酸致痫大鼠癫痫发作及其海马组织中Tau蛋白表达的影响[D]. 李娜.河北医科大学 2013
[10]硒对饮水型氟中毒致脑损伤的干预分子机理研究[D]. 吴益.浙江师范大学 2011
本文编号：3696026
【文章页数】：93 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
摘要
第一章 文献综述
1 氟对中枢神经系统的影响
1.0 氟污染现状
1.1 氟对中枢神经系统的病理学损伤
1.2 氟对智力发育的影响
2 氟中毒的致病机理
2.1 氟影响自由基生成和氧化应激
2.2 氟引起细胞凋亡的发生
2.3 其它元素对氟中毒效应的影响
3 细胞骨架在神经系统中的作用
3.1 细胞骨架的组成与功能
3.2 细胞骨架在神经细胞功能发挥中的作用
3.3 细胞骨架装配对神经细胞功能的影响
4 氟中毒与信号通路的关系
4.1 RhoA信号通路
4.2 氟中毒与其他信号通路的关系
5 目前研究存在的问题与本研究的意义
参考文献
第二章 氟化钠对子代小鼠大脑皮层神经元细胞骨架及突触相关蛋白表达的影响
1 试验材料
1.1 试验试剂
1.2 仪器设备
1.3 试验动物
1.4 取材方法
2 试验方法
2.1 子代小鼠学习记忆能力检测
2.2 病理组织学染色
2.3 Real-time PCR检测基因表达变化
2.4 Western blot检测蛋白表达量的变化
2.5 数据分析
3 结果与分析
3.1 氟中毒对子代小鼠脑重/体重的影响
3.2 氟中毒对子代小鼠学习记忆能力的影响
3.3 氟暴露子代小鼠大脑皮层病理学变化
3.4 氟中毒对子代小鼠大脑MAP2表达量的影响
3.5 氟中毒对子代小鼠大脑SYP和Dbn表达量的影响
3.6 氟中毒对子代小鼠大脑谷氨酸受体蛋白表达量的影响
4 讨论
参考文献
第三章 氟化钠对神经细胞骨架损伤及神经信号传递的影响
1 试验材料
1.1 试验试剂
1.2 仪器设备
1.3 细胞培养
2 试验方法
2.1 氟暴露对神经细胞形态的影响
2.2 MTT法检测细胞存活率
2.3 氟对神经细胞膜通透性的影响
2.4 神经细胞F-actin染色
2.5 细胞超微结构的变化
2.6 Western blot检测MAP2和SYP蛋白的表达
2.7 谷氨酸的测定
2.8 谷氨酸受体的表达
2.9 数据分析
3 结果与分析
3.1 细胞形态学观察
3.2 NaF对神经细胞存活率和细胞膜通透性的影响
3.3 NaF对细胞骨架的影响
3.4 NaF对神经细胞超微结构的影响
3.5 NaF对神经细胞MAP2和SYP蛋白表达量的影响
3.6 NaF对谷氨酸及其受体蛋白的影响
4 讨论
参考文献
第四章 氟化钠对神经细胞RhoA/ROCK信号通路的影响
1 试验材料
1.1 试验试剂及配方
1.2 细胞培养
2 试验方法
2.1 酵母双杂交筛选MAP2互作蛋白
2.2 神经细胞骨架染色
2.3 氟暴露对神经细胞微管相关蛋白Tau mRNA表达的影响
2.4 氟暴露对神经细胞RhoA/ROCK信号通路相关基因转录水平的变化
2.5 氟暴露对神经细胞Tau蛋白表达的影响
2.6 氟暴露对神经细胞RhoA/ROCK信号通路相关蛋白的影响
2.7 Y-27632对神经细胞形态的影响
2.8 Y-27632对神经细胞存活率的影响
2.9 Y-27632对神经细胞RhoA/ROCK信号通路的影响
2.10 Y-27632对神经细胞骨架相关蛋白表达的影响
2.11 数据分析
3 结果与分析
3.1 MAP2互作蛋白的筛选结果
3.2 氟暴露对神经细胞骨架的影响
3.3 氟暴露对神经细胞Tau蛋白表达的影响
3.4 氟暴露对大脑皮层神经元中Tau蛋白的表达的影响
3.5 氟激活了神经细胞RhoA/ROCK信号通路
3.6 氟暴露子代小鼠大脑皮层神经元中RhoA/ROCK信号通路的激活
3.7 Y-27632对神经细胞形态学的影响
3.8 Y-27632能缓解氟对神经细胞存活率的抑制作用
3.9 Y-27632对神经细胞RhoA/ROCK信号通路的抑制作用
3.10 抑制RhoA/ROCK信号通路对细胞骨架相关蛋白表达的影响
4 讨论
参考文献
全文总结
Abstract
缩略词
个人简介
后记
【参考文献】：
期刊论文
[1]Nestin蛋白在白血病及其他恶性血液肿瘤中的研究进展[J]. 王艳飞,梅芬,撒亚莲. 生命科学. 2016(07)
[2]Rho A/Rho kinase in spinal cord injury[J]. Xiangbing Wu,Xiao-ming Xu. Neural Regeneration Research. 2016(01)
[3]慢性氟中毒致学习记忆损伤的脑内突触机制[J]. 章子贵,孙岩,郑祥仁. 浙江师范大学学报(自然科学版). 2015(01)
[4]中国地方病防治杂志2009～2013年刊载地方性氟中毒文献分析[J]. 高超,张爱君. 中国地方病防治杂志. 2014(06)
[5]非常规肌球蛋白与突触可塑性[J]. 邢方凯,罗鹏,张吉强. 生命的化学. 2012(01)
[6]氧化和化学应激的防御性转导通路——Nrf2/ARE[J]. 蔡维霞,张军,胡大海. 中国生物化学与分子生物学报. 2009(04)
[7]急性氟中毒小鼠大脑皮层神经元DNARNA和NOS的活性观察[J]. 周红军,李积胜,王国明. 微量元素与健康研究. 2008(01)
[8]氟化钠导致小鼠神经细胞凋亡的研究[J]. 王俊玲. 毒理学杂志. 2007(05)
[9]神经微丝与视神经病变[J]. 邓秋琼,刘金华. 中国实用眼科杂志. 2006(07)
[10]氟中毒及其相关研究技术[J]. 王金明,刘海涛,马俊杰,王俊东. 动物医学进展. 2006(03)
博士论文
[1]基于多组学分析的马氏珠母贝矿化相关基因研究[D]. 郑哲.广东海洋大学 2017
[2]体内外研究CXCL1诱导以caspase-3为依赖的微管相关蛋白Tau的剪切[D]. 张晓芳.昆明医科大学 2016
[3]水稻中激素和肌醇磷酸代谢相关基因的抗逆功能研究[D]. 都浩.华中农业大学 2013
[4]RhoA/Rho激酶信号通路在心肌肥厚及糖尿病心肌病中的作用研究[D]. 关胜江.河北医科大学 2009
[5]中间丝蛋白Nestin在肾小管上皮细胞转分化中表达的研究[D]. 尤莉.复旦大学 2008
[6]新生未成熟大鼠少突胶质前体细胞缺氧缺糖模型中RhoA和细胞骨架蛋白的研究[D]. 钟琳.四川大学 2007
硕士论文
[1]围产期氟暴露对仔鼠学习记忆及海马中miR-124与miR-132表达的影响[D]. 张玉良.山西农业大学 2016
[2]糖浓度增加致海马神经元MLCK升高对细胞微丝骨架的影响[D]. 杜贵琴.贵州医科大学 2016
[3]氟对小鼠海马神经毒性作用及相关基因的影响[D]. 陈慧娟.山西农业大学 2015
[4]不同钙水平对氟致大鼠骨组织细胞凋亡线粒体通路的作用[D]. 张东芳.山西农业大学 2014
[5]高氟对体外培养SD大鼠大脑皮质神经细胞毒性研究[D]. 李冲.河南科技学院 2014
[6]不同饮食钙条件对饮水型氟中毒致子代脑发育的干预作用[D]. 钱炜.浙江师范大学 2014
[7]氟、砷暴露对仔鼠生长发育和学习记忆能力的影响及其机制研究[D]. 李明艳.河北联合大学 2014
[8]内质网应激在氟致神经干细胞凋亡中的作用[D]. 雷蓉蓉.华中科技大学 2013
[9]重组腺相关病毒神经肽Y基因转染对红藻氨酸致痫大鼠癫痫发作及其海马组织中Tau蛋白表达的影响[D]. 李娜.河北医科大学 2013
[10]硒对饮水型氟中毒致脑损伤的干预分子机理研究[D]. 吴益.浙江师范大学 2011
本文编号：3696026
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